玻璃器皿的清洗、包扎及灭菌.docx

实验 玻璃器皿的清洗包扎及高压蒸汽灭菌 一、目的要求 1、 了解高压蒸汽灭菌的基本原理。 2、 学习高压蒸汽灭菌的操作方法。 二、实验原理 灭菌是指杀死或消灭一定环境中的所有微生物， 灭菌的方法分物理和化学灭菌法两 大类。本实验主要介绍物理方法的一种，即加热灭菌。 加热灭菌包括湿热和干热灭菌两种。通过加热使菌体内 ?蛋白质凝固变性，从 而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需 要的温度越低。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，因为在湿热情况下，菌体 吸收水分，使蛋白质易于凝固；同时湿热的穿透力强，可增加灭菌效力。 高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌用途广，效率高，是微生物学实验中最常用的灭 菌方法。这种灭菌方法是基于水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理设计的。当 蒸汽压力达到 1.05kg/cm2 时，水蒸气的温度升高到 121℃，经 15～30min，可全部杀 死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。一般培养基、玻璃器皿以及传染性 标本和工作服等都可应用此法灭菌。 干热灭菌法：通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫干热灭菌。一般是把待灭菌 的物品包装就绪后，放入电烘箱中烘烤，即加热至 160～170℃维持 1～2h。 火焰灭菌：直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。对于接种环，接种针或其它金属用具， 可直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口， 也采用通过火焰而达到灭菌的目的。 三、实验器材 1、器皿：平皿（ 10 个/ 组）， 1ml 吸管（ 9 支/ 组），试管 18× 180（10 支/ 组）， 试管（ 15× 150）（12/ 组），三角锥瓶 500ml（3 个/ 组）、三角锥瓶 500ml（内装蒸馏 水 250ml），10ml 吸管 2、其他：牛皮纸或报纸，酒精灯，棉花，高压蒸汽菌锅，电烘箱，线绳 ,毛刷等 四、操作方法 （一）玻璃器皿的清洗包扎 玻璃器皿在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃器皿于灭菌后不被外界杂 菌所污染。 1、将平皿用纸包扎好，以 5～8 个为一包； 2、吸管应在管口约 0.5 厘米以下的地方塞入少许长约 1.5 厘米的棉花，以拉直的 曲别针一端放在棉花的中心，轻轻捅入管口，松紧必须适中，松紧程度以吹气时通气 顺畅而不致下滑为准，管口外露的棉花纤维统一通过火焰烧去。然后，将吸管尖端放 在 4-5 厘米宽的长条纸的一端约与纸条成 45° 角，折叠纸条，包住吸管尖端，然后将 吸管卷入纸条内，末端剩余纸条折叠打结，待灭菌。 3、三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外 部杂菌所污染； 4、试管塞上棉花塞，多支扎成一捆外用牛皮纸或两层旧报纸与细线包扎好。 （二）干热灭菌 将包扎好的试管、平皿、三角锥瓶放入干燥烘箱内，注意不要摆放太密，以免妨 碍空气流通；不得使器皿与烘箱的内层底板直接接触。将烘箱的温度升至 160～170℃ 并恒温 1～2h，注意勿使温度过高，超过 170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃 烧。如果是为了烤干玻璃器皿，温度为 120℃持续 30 分钟即可。温度降至 60～70℃时 方可打开箱门，取出物品，否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂。 （三）高压蒸汽灭菌 1、加水： 打开灭菌锅盖， 向锅内加水到水位线。 立式消毒锅最好用已煮开过的水， 以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。 2、装料、加盖 ：将待灭菌物品放好后，关闭灭菌器盖，采用对角式均匀拧紧锅 盖上的螺旋，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。 3、排气：打开排气口 ( 也叫放气阀 ) 。用电炉加热，待水煮沸后，水蒸气和空气一 起从排气孔排出，当有大量蒸汽排出时，维持 5min，使锅内冷空气完全排净。 4、升压、保压和降压 ：当锅内冷空气排净时，即可关闭排气阀，压力开始上升。 当压力上升至所需压力时，控制电压以维持恒温，并开始计算灭菌时间，待时间达到 要求（一般培养基和器皿灭菌控制在 121℃，20min）后，停止加热，待压力降至接近 “0”时，打开放气阀。注意不能过早过急地排气，否则会由于瓶内压力下降的速度比 锅内慢而造成瓶内液体冲出容器之外。 五、思考题 1、 吸管在灭菌前应如何处理？ 2、 高压蒸汽灭菌开始之前， 为什么要将锅内冷空气排尽？灭菌完毕后， 为什么要待压 力降到 0 时才能打开排气阀，开盖取物？