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2019/3/28 1 实验八 酵母菌的形态观察、 细菌的生理生化反应 2019/3/28 2 一、目的 1 、观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区 分酵母菌死活细胞的实验方法，学习观察酵 母菌液泡、肝糖粒的方法； 2 、了解糖发酵的原理和在肠道细菌鉴定中的 重要作用； 3 、了解吲哚、甲基红、伏 - 普反应的原理及其 在肠道菌鉴定中的意义和方法。 2019/3/28 3 二、基本原理 酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖。美 兰是一种无毒性的染料，可用于鉴别细胞的死活。 糖分解试验是常用的鉴别微生物的生化反应，在肠道 细菌的鉴定上尤为重要。绝大多数细菌都能利用糖类作为 碳源和能源，但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的 差异。发酵培养基含有蛋白胨，指示剂，倒置的德汉氏小 管和不同的糖类。当发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂可由紫 色（ pH6.8 ）变为黄色（ pH5.2 ）。气体的产生可由倒置的 德汉氏小管中有无气泡来证明。 吲哚、甲基红、伏 - 普这三个试验主要是用来快速鉴 别大肠杆菌和产气杆菌，多用于水的细菌学检查。大肠杆 菌虽非致病菌，但在饮用水中若超过一定数量，则表示受 粪便污染。产气杆菌也广泛存在于自然界中，因此检查水 时要将两者分开。 2019/3/28 4 三、器材 1 、菌种：酿酒酵母、热带假丝酵母培养约 2d 的培养物；大 肠杆菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌等。 2 、培养基：牛肉膏蛋白胨斜面培养基， PDA 液体培养基、 葡萄糖发酵培养基试管和乳糖发酵培养基试 管、蛋白胨水培养基、葡萄糖蛋白胨水培养基 3 、试剂：吕氏碱性美兰染色液、中性红染色液、碘液、甲 基红指示剂， 40 ％ KOH ， 5 ％ α - 萘酚，乙醚，吲 哚试剂等。 4 、仪器或其他用具： 显微镜、酒精灯、载玻片、 盖玻片等。 2019/3/28 5 四、操作步骤 1 、酵母菌的形态观察： （ 1 ）酵母菌死活细胞的鉴别： 取菌液 滴加美兰染色液 盖上盖玻片 镜检 。 （ 2 ）酵母菌液泡的观察： 取菌液 滴加中性红染色液 盖上盖玻片 镜检。 （ 3 ）酵母菌细胞中肝糖粒的观察： 取菌液 滴加碘液 盖上盖玻片 镜检。 2 、细菌的生理生化反应： 将供试菌株分别接种在相应的培养液中，置适宜的温箱中恒温培 养。在规定的时间内，选用相应的指示剂测定和观察 试验结果 。 2019/3/28 6 2019/3/28 7 2019/3/28 8 2019/3/28 9 吲哚试验 2019/3/28 10 2019/3/28 11 乙酰甲基甲醇试验 ( 伏 - 普 ) 2019/3/28 12
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