实验五虎杖中羟基蒽醌的提取.pptVIP

天然药物化学实验 Experiment of Natural Medicinal Chemistry 厦门大学医学院药学系 参考书： 《现代中草药成分化学》 吴寿金，赵泰等 中国医药科技出版社 《中草药有效成分提取与分离》徐任生， 陈仲良 上海科技出版社 实验五 虎杖中羟基蒽醌的提取、 分离与鉴定 ? 一、实验目的 ? 二、实验原理 ? 三、提取实验 ? 四、分离实验 ? 五、鉴定方法 ? 六、结果与讨论 一、实验目的 ? 掌握蒽醌类化合物的提取分离方法及原 理 ? 掌握低压柱层析分离技术及薄层层析鉴 定 ? 了解反相色谱的原理及方法及制备色谱 的原理 二、 实验原理 ? 利用化合物的酸性不同进行 分离 ? 利用吸附色谱原理进行分离 ? 利用反相色谱进行分离 化合物结构比较 ? 1 、大黄素（ Emodin ） ? 2 、大黄酚（ Chrysophanol ） ? 3 、大黄素 6- 甲醚，（ Emodinmonomethl ether ） ? 4 、大黄素 6- 甲醚 6-D- 葡萄糖苷 （ Anthraglycosibe A ） OH HO OH CH 3 O O OH OH CH 3 O O OH OH CH 3 O CH O O 3 O CH 3 O OH O O CH 3 glu 大黄素 大黄酚 大黄素 6- 甲醚 大黄素 6- 甲醚 6-D- 葡萄糖苷 羟基 3 个 羟基 2 个 羟基 2 个 羟基 1 个 实验设计 游离蒽醌分离 ? （ 1 ）、强酸性成分的分离：总蒽醌的乙醚液＋加 5% 碳酸氢钠 水溶液萃取得 强酸性成分：大黄素和大黄酸 。 ? （ 2 ）、中等酸性成分的分离：碳酸氢钠萃取过的乙醚 液用 5% 碳酸钠 溶液萃取得 大黄酚和大黄素 6- 甲醚混合 物 。 ? （ 3 ）、中性成分 —— 甾醇类化合物分离：氢氧化钠萃 取过的乙醚液，得中性成分 ? （ 4 ）、强酸性成分的反相分离：取（ 1 ）分离得到的 强酸性部分 15mg ，溶于甲醇中，用中压色谱或制备色 谱分离制备，色谱条件： ODS 柱或 ODS 填料，流动相： 甲醇：水为 75 ： 25 ，与标准品进行对比实验。 三、提取实验 ? 乙醇总提取物的制备 ? 虎杖粗粉 200g ， 1000ml 圆底烧瓶回流 ? 500ml 乙醇 ? 300ml 乙醇 ? 250ml 乙醇 ? 回流 30 分钟，合并减压回收 四、分离实验 ? 1 、亲脂性成分与亲水性成分的分离 ? 2 、游离蒽醌分离 ? （ 1 ）强酸性成分的分离 ? （ 2 ）中等酸性成分的分离 ? （ 3 ）中性成分甾醇类化合物分离 ? （ 4 ）强酸性成分的反相分离 基本操作 ? 低压柱层析分离技术 柱层析分离的一种 应用广泛 第一步 装柱 硅胶浸泡于石油醚中 搅拌均匀 一次性倒入柱中 装柱 预先加入溶剂 装柱 一次性倒入 装柱 敲打 均匀紧密 第二步 拌样 ? 样品 10mg 溶于溶剂中，全溶 ? 加拌样硅胶 100 － 150 目 1:1-1.5 ? 搅拌均匀至干 ? 必要时旋蒸至干 拌样 溶解 搅拌 至干 第三步 上样 ? 均匀 加到柱中 第四步 洗脱与接收 ? 用不同比例的石油醚和乙酸乙酯进行梯 度洗脱 ? 每个极性洗脱 3 － 5 个保留体积 ? 每个保留体积接收 10 － 20 份馏分 ? 整个过程加低压 第五步 浓缩 浓缩方法 ? 溶剂浓缩 ? 自然挥干 ? 减压浓缩 ? 冻干 第六步 薄层鉴定 ? 吸附剂：硅胶 — CMC ? 展开剂： C 6 H 6 — EtoAc(3:2 或 97 ： 9) ? 显色剂：（ 1 ）氨蒸气熏。（ 2 ） 5%KOH 喷雾 虎杖亲脂性成分与亲水性成分的分离 ? 膏状物加水 10ml ，乙醚 100ml 充分振摇后 放置 ? 将乙醚液倾于 500ml 三角瓶中 ? 再于烧瓶中加 50ml 乙醚振摇，放置，倾 出乙醚液 ? 同法操作六次 ? 合