水中微生物的检测.pptxVIP

综合实验二：水中细菌总数和大肠菌群的测定 一、实验目的 学习并掌握水样采集的方法、规则及注意事项； 了解检查水中细菌总数和总大肠菌群的测定方法及检测意义； 学习对所检测的水样作综合分析。 二、实验原理 水体的微生物污染问题日趋严重： 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量有机物质，适于各种微生物的生长； 水中的微生物污染来源：土壤，以及人类、动物的排泄物污染； 水体中少数致病微生物（主要来自人或动物的粪便污染）可导致某些肠道传染病传播。 水微生物检测可用于评价水质情况，预报水质的污染趋势，以保证水质的卫生安全。 在实际工作中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对水体中各种可能存在的致病性微生 物一一进行检测。一般选择有代表性的一种或一类微生物作为指示菌，通过对指示菌的检测， 来了解水体是否受到过的微生物污染，是否有肠道病原微生物存在的可能。 水微生物的监测指标： ⑴菌落总数 ①是指 1ml 水样在营养琼脂培养基中，于 37℃经 24h 培养后，所生长的细菌菌落的总数。 ②检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。水样菌 落总数越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能性越大，但不能说明 污染的来源。 ⑵总大肠菌群 ①是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在 24h 内产酸产气的革兰氏阴性 无芽胞杆菌。 ②检测意义：作为粪便污染的指标。水样总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度， 而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。 多管发酵法测定总大肠杆菌群 ⑴初发酵试验：采用乳糖蛋白胨培养液 37℃培养 24h，观察产酸产气情况，产酸产气说明水 中存在大肠菌群，为阳性结果。但是，有个别其他类型细菌在此条件下可能产气，而不属于 大肠菌群；产酸不产气的发酵管，也不一定是非大肠菌群，因其量少，可能延迟 48 h 后产 气，这两种视为可疑结果，需进行下面的实验，才能确定是否是大肠菌群。 ⑵平板分离：对阳性管培养物及假阳性管培养物，接种于伊红美蓝培养基，观察菌落特征， 将符合大肠菌群???落特征的菌落并进行革兰氏染色和镜检，只有染色为革兰式阴性、无芽孢 杆菌的菌落才是大肠菌群菌落。 ⑶复发酵证实试验：将以上两次实验已证实为大肠菌群阳性的菌群，接种于乳糖蛋白胨培养 液，进行复发酵证实试验，经 24 h 培养产酸又产气的，最终确定为大肠菌群阳性结果。 最后，根据确定有大肠菌群存在的初发酵管（瓶数目），查阅专用统计表，得出总大肠菌指 数。 三、实验用品 溶液及试剂： 蛋白胨、Nacl、20%乳糖、2%伊红水溶液、0.5%美兰水溶液、牛肉膏、1.6%溴甲酚紫 乙醇溶液、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液、蒸馏水、NaOH 溶液、 HCl 溶液等 仪器和其他用品： 试管、德汉式小管、三角瓶、注射器、搪瓷缸、培养皿、载玻片、电磁炉、玻璃棒、移 液管、酒精灯、接种环、试管架、恒温培养箱、灭菌锅、显微镜等 四、实验内容及步骤 1.培养基配制;一倍乳糖蛋白胨培养液 蛋白胨 2g;