人中性粒细胞弹性蛋白酶与其抑制剂研究.docxVIP

人中性粒细胞弹性蛋白酶及其抑制剂研究 人中性粒细胞弹性蛋白酶 (human neutrophi l elastase ， HNE)在机体各种炎症反应、组织 损伤重构（如肺炎）、成人呼吸窘迫综合征、肺纤维化、急（慢）性肺损伤、肺水肿、动脉 粥样硬化、 硬皮病等病理过程中起重要作用， 并且具有促进病毒、 细菌的侵人及癌细胞转移 的功能。 炎症机制研究显示， 体内该酶及其内源性抑制剂的平衡失调可导致组织基质降解和 炎症的恶化。 目前，国外用 HNE抑制剂来治疗这一类炎症疾病的研究非常广泛， 并已成功开 发出第一个以抑制 HNE为治疗途径的上市药物西维来司钠 （ sivelestat sodium hydrate ）， 从而促进了 HNE抑制剂的研究与开发。 1 BM的生理、病理作用及结构特征 HNE，又称人白细胞弹性蛋白酶（ human leukocyte elastase ，IRE），属于基质金 属蛋白酶类（ matrix metalloproteinases,MMPs ），即 MMP-12,是一种金属离子依赖性基质 降解酶， 需要微量 Zn2+和 Ca2+ 离子的存在才具有酶活性， 其底物类型非常广泛， 几乎可降解 细胞外基质中的所有蛋白。白细胞、 巨嗜细胞、 肥大细胞内都存在着这种酶， 中性粒细胞中 其含量很高，大约每 106 个细胞中含有 HNE的总量为 3 μ g。生理条件下， HNE可以协助清除 异源性物质， 促进吞噬细胞消除有害病菌， 并帮助消化受损组织， 有助于伤口的愈合与组织 再生。 而 HNE过量表达则会对机体组织、 基质造成危害， 表现为破坏血管壁组分， 使中性粒 细胞更容易渗出血管并向炎症部位趋化集中及释放 IL-8 、TNF-α 等炎症因子；它还能降解 细胞基质，催化 caspase 3 诱导的细胞凋亡。据报道， HNE还能增强病毒、细菌及癌细胞对 正常细胞的黏附能力，促进微生物的入侵及癌细胞的增殖和转移。 HNE存在于中性粒细胞嗜苯胺蓝颗粒中， 是由 218 个氨基酸组成的单一肽链， 分子 质量大约 25.9 kD ，含 4 个二硫键，是丝氨酸蛋白酶家族一员，因此与其他丝氨酸家族蛋白 酶具有 30%～ 40％的同源性， 最适 pH 值接近中性。 HNE的基因位于 19 号染色体的短臂末端， 是 50kb 的 DNA片段，成熟的中性粒细胞中并无 HNE的 mRNA表达，说明此种酶只在未成熟的 骨髓细胞中合成。酶的催化中心由 His 41 、 Asp 88 和 Ser 173 三个氨基酸残基构成，空间 位置相互靠近，均由发夹结构延伸到蛋白表面，其中 Ser 残基侧链上羟基具有很高的亲核 性，容易结合不带电的小分子氨基酸，如 Val 、 Ala 、 Leu、 Met 等。 2 BM抑制剂 HNE对机体会产生各种病理作用，故关于其抑制剂的研究也受到广泛关注，其中包 括内源性抑制剂、合成的外源性抑制剂（蛋白类、拟肽和杂环化合物）以及天然提取物等。 2.1 内源性抑制剂 人体内存在许多种针对 HNE的快速反应抑制蛋白， 每一种蛋白存在于不同的生理部 位而发挥不同的作用。选择性 HNE抑制剂 Elafin 存在于皮肤及上皮组织中，分子质量为 7 kD，是酸稳定性多肤； α 1- 抗蛋白酶（ α 1-antiprotease ）在血浆中具高浓度，并由此进入 组织发挥作用。上述内源性抑制剂包括 α2- 巨球蛋白均为分泌性弹性蛋白酶抑制剂，其中 α1 - 抗蛋白酶被认为是在体内各种脏器中起主导作用的内源性 HNE抑制剂。 2.1.1 α 1- 抗蛋白酶 它在许多生理、病理过程中（如血液凝结、纤维蛋白溶解、 炎症等） 起调节蛋白分解的作用， 并且对防止蛋白水解性组织损伤起重要作用。 据报道先天 性α 1- 抗蛋白酶缺损极易引发肺气肿和自发性肺纤维化（ idiopathic pulmonary fibrosi s）。 1- 抗蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族成员，存在于血浆中，平均分子质量 约 50 kD ，含有 3 个 β 片层结构和若干 α 螺旋结构， 其中 Met 358 决定了它对 HNE的抑制特异性， HNE与之结合后形成稳定酯结构，致使酶的活性中心构象发生改变，不能去酞基化， 这种抑制机制被称为自杀性底物抑制。对 α1- 抗蛋白酶的结构研究显示，它和其他 HNE拮抗 剂一样，在酶结合位点或附近的 Met 上的硫醚键对化学氧化非常敏感， 一旦 Met 被亚砜化后， α1 - 抗蛋白酶即失活。 在体内氧化自由基的增多是造成这种内源性抑制剂失活的主要原因， 中性粒细胞分 泌出的髓过氧化物酶通过过氧化酶 - 过氧化氢 - 卤化物系统使 α 1_ 抗蛋白酶氧化失活，从而 达到 HNE活性增高， 促进细