2020第10章遗传密码.ppt

第 10 章 遗传密码 一 . 遗传密码 — 三联子 mRNA 上每 3 个核苷酸翻译成蛋白质多肽链上的一 个氨基酸，这 3 个核苷酸就称为 密码子 。也叫 三联子密码 。 遗传密码： mRNA 中核苷酸的排列顺序。 起始： AUG 终止： UAA UAG UGA 方向： 5 － 3 （ mRNA ） Ser Tyr 5 5 二 . 遗传密码的破译 ? 遗传密码的破译，即确定代表每种氨基酸的具体密码。 ? 蛋白质中的氨基酸序列是由 mRNA 中的核苷酸序列决 定的。 mRNA 中只有 4 种核苷酸，而蛋白质中有 20 种氨 基酸。 数学考虑 ： 一种碱基 → 一种 Aa 4 1 = 4 ＜ 20 二种碱基 → 一种 Aa 4 2 = 16 ＜ 20 三种碱基 → 一种 Aa 4 3 = 64 ＞ 20 1. 实验证实三联子密码 1 、 mRNA 模板中插入、删除一个核苷酸后，该密码子后 面的氨基酸序列全部改变。 2 、同时插入、删除一个不同核苷酸后，后续蛋白质不 变。 3 、同时删除三个核苷酸后，翻译减少一个氨基酸，序 列没有变化。 烟草花叶病毒外壳蛋白亚基由 400 个氨基酸组成，而 相应的 RNA 片段长约 1200 个核苷酸 1 ）遗传学证据 A. 以均聚物、随机共聚物和特定序列的共聚物为模板 指导多肽的合成 制备大肠杆菌的无细胞合成体系： （ 在含 DNA 、 mRNA 、 tRNA 、核糖体、 AA-tRNA 合成酶及其他 酶类的抽提物中加入 DNase ，降解体系中的 DNA ，耗尽 mRNA 时，体系中的蛋白质合成即停止） 当补充外源 mRNA 或人工合成的各种均聚物或共聚 物作为模板以及 ATP 、 GTP 、氨基酸等成分时又能合 成新的肽链，新生肽链的氨基酸顺序由外加的模板 所决定。 因此，分析比较加入的模板和合成的肽链 即可推知编码某些氨基酸的密码。 2 ）实验破译三联子密码 Marshall Nirenberg (1961) In vitro Poly(U) poly(Phe) peptide Poly(C) poly(Pro) peptide Poly(A) poly(Lys) peptide Poly(G) poly(Gly) peptide But poly(UCUCUC…) poly(Ser -Leu-Ser- Leu…) UCU/CUC Ser/Leu ? 无细胞体系中 Mg 2+ 浓度很高，人工合成的多聚核苷酸不需要 起始密码子就能指导多肽的生物合成，读码起始是随机的 。然而，在生理 Mg 2+ 条件下，没有起始密码子的多核苷酸不 能被用作多肽合成的模板。 ? 以多聚三核苷酸作为模板可得到有 3 种氨基酸组成 的多肽。如以多聚（ UUC ）为模板，可能有 3 种起 读方式： 5 …… UUC UUC UUC UUC UUC …… 3 或 5 …… UCU UCU UCU UCU UCU …… 3 或 5 …… CUU CUU CUU CUU CUU …… 3 ? 根据读码起点不同，产生的密码子可能是 UUC （ Phe ）、 UCU （ Ser ）或 CUU （ Leu ），所以得到的 多肽可能是多聚苯丙氨酸、多聚丝氨酸或多聚亮 氨酸，由此可知 UUC 、 UCU 、 CUU 分别是苯丙氨、丝 氨酸及亮氨酸的密码子。 B 核糖体结合技术 ? 1964 年 Nirenberg 又采用 三联体结合实验 ? (1) tRNA 和氨基酸及三联 体的结合是特异的； ? (2) 上述结合的复合体大 分子是不能通过硝酸纤维 滤膜的微孔，而 tRNA- 氨 基酸的复合体是可以通过 的。 通过该方法， 61 个 codons 被破译 ( 仅剩 UAA,UAG,UGA ？ ) Stop codon 的证实 ? 这个方法是以人工合成的 三 核苷酸 如 UUU 、 UCU 、 UGU 等 为