2020氨基酸等电点计算.ppt

氨基酸等电点 的计算和应用 郑芳芳 蛋白质 (protein) 是生命现象的物质 基础，氨基酸 (amino acid) 是蛋白 质的基本结构单位。天 然存在于蛋白质中的氨 基酸共有 20 种。氨基酸 的一般结构为 氨基酸既含有能释放 H + 的基团 ( 如羧基 ) 。也含 有接受 H + 的基团 ( 如氨基 ) ，因此是两性化合物， 亦称两性电解质或兼性离子。 氨基酸的两性形式示意图 酸性氨基酸：天冬氨酸 (Asp) 、谷氨酸 (Glu) 碱性氨基酸：赖氨酸 (Lys) 、精氨酸 (Arg) 组氨酸 (His) 20 种常见天然氨基酸中 3 个有碱性 取代基，能和 H + 结合，称为碱性 氨基酸； 4 个有酸性取代基，可以 离解出 H + ，称为酸性氨基酸；大多 数为中性氨基酸 氨基酸的等电点 (isoelectric point) ： 氨基 酸的等电点在一定 pH 条件下 , 某种氨基酸 接受或给出质子的程度相等 , 分子所带的净 电荷为零 , 此时溶液的 pH 值就称为该氨基 酸的等电点 (pI) NH 3 + NH 3 + NH 2 | +OH - | +OH - | H-C-COOH ======== H-C-COO - ====== H-C-COO - | +H + | +H + | R R R 阳离子 两性离子 阴离子 pHpI pH=pI pHpI ? 氨基酸等电点的计算 ? 公式 ： pH=(pK n +pK n+1 )/2 ? n: 氨基酸（或多肽）完全质子化时带正电荷基团数 ? pK: 解离基团的解离常数 ? 等电点时溶液的 pH 与氨基酸的浓度无关。通常氨基 酸的的酸解离与碱解离的程度不同，纯氨基酸溶液 不能达到其等电点，可以通过加入酸或碱调节其 pH 以达到等电点 pH 等电点的计算步骤 先将氨基酸 / 多肽可解离基团的 pK 值自小到大 按顺序排列 判断 n 值 判断氨基酸的分类 酸性氨基酸和中性氨基酸的完全质子化数 n=1 碱性氨基酸的完全质子化数 n=2 等电点的应用 1 电泳分离 ? 应用 氨基酸的分离与分析 ? 氨基电泳：带电颗粒在电场中移动的现象称为电泳 ? 酸不同（ pI 不同，大小不同），在电场中泳动速度不同， 因此可以通过电泳将氨基酸彼此分开 ? 当 pH=pI 时，氨基酸呈兼性离子，在电场中不移动 ? 当 pHpI 时，氨基酸带负电荷，在电场中向正极移动 ? 当 pHpI 时，氨基酸带正电荷，在电场中向负极移 蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的，在电 场中能向电场的正极或负极移动，从而分离蛋白质。根 据支撑物不同，有薄膜电泳、凝胶电泳等。 等电点应用 2 蛋白质沉淀与分离 处于等电点的蛋白质溶解度最小。当蛋 白质混合物的 pH 被调到其中一种成分的等 电点时，该蛋白质将大部分或全部沉淀下来。 那些等电点高于或低于该 pH 的蛋白质仍保 留在溶液中，可利用此性质进行蛋白质的分 离。这样沉淀出来的蛋白质保持天然构象， 能 再 溶 解 于 水 并 具 有 天 然 的 活 性 参考文献 1 李克安《分析化学教程》 北京大学出版社出版 2005 年 5 月第 1 版 2 陈阅增