中科院-生物化学与分子生物学考博补充一.docVIP

生物膜的运输机制？ 细胞膜物质转运的方式有 单纯扩散，易化扩散，主动转运，出胞与入胞 各自特点和机制为： 单纯扩散 ，脂溶性的小分子 物质或离子从膜的高浓度侧移向低浓度一侧的现象 称为单纯扩散。 单纯扩散的特点是， 不需膜蛋白质帮助， 不消耗细胞自身代谢能量，顺浓度差进行，单纯扩 散转运的物质为 脂溶性小分子物质 易化扩散，指水溶性的小分子 物质或离子在膜蛋白质 的帮助下从膜的高浓度一侧移向低浓度 一侧的转运方式。易化扩散的类型有载体转运。 载体转运的特点有特异性， 饱和性，竞争性 抑制。载体转运转运的物质：主要是水溶性小分子有机物 。 主动转运，指在细胞膜上生物泵的作用下 , 通过细胞本身的耗能将物质从膜的低浓度一侧向 高浓度的转运。 主动转运转运的物质主要是 离子物质如钠， 钾，钙。特点是需要生物泵作用， 消化细胞 自身代谢能量，逆浓度差进行 。 出胞与入胞， 大分子物质从细胞内移向细胞外称为出胞。 大分子物质从细胞外移向细胞内称 为入胞。 出胞与入胞转运的物质为大分子物质。 出胞与入胞的特点为需要细胞膜的运动， 消 耗细胞自身代谢能量 。 DNA 复制原理？ DNA 复制基本规律：①复制过程为半保留方式；②原核生物单点起始 , 真核生物多点起 始, 复制方向多为双向 , 也有单向；③复制方式呈多样性 , ( 直线型、 Q 型、滚动环型 等 ) ； ④新链合成需要引物 , 引物 RNA长度—般为几个～ 10 个核苷酸 , 新链合成方向 5’→ 3 ’, 与 模板链反向 , 碱基互补；⑤复制为半不连续的 , 以解决复制过程中 , 两条不同极性的链同时延 伸问题 , 即 —条链可按 5’→ 3 ’方向连续合成称为前导链 , 另一条链先按 5’→ 3 ’方向 合成许多不连续的冈崎片段 ( 原核生物一般长 1000-2000 个核苷酸 , 真核生物一般长 100--200 个核苷酸 ), 再通过连接酶连接成完整链 , 称后随链 , 且前导链与后随链合成速度 不完全—致 , 前者快 , 后者慢 . DNA复制主要包括引发、延伸、终止三个阶段 . DNA的复制 是一个边解旋边复制的过程 . 复制开始时 ,DNA 分子首先利用细胞提供的能量 , 在 解旋酶的作用下 , 把两条螺旋的双链解开 , 这个过程叫解旋 . 然后 , 以解开的每一段母链为模 板 , 以周围环境中的四种脱氧核苷酸为原料 , 按照碱基配对互补配对原则 , 在 DNA 聚合酶的 作用下 , 各自合成与母链互补的一段子链 . 随着解旋过程的进行 , 新合成的子链也不断地延 伸 , 同时 , 每条子链与其母链盘绕成双螺旋结构 , 从而各形成一个新的 DNA 分子 . 这样 , 复制 结束后 , 一个 DNA分子 , 通过细胞分裂分配到两个子细胞中去 ! 免疫共沉淀与 ChiSeq 原理。 什么是 ChIP? ChIP 的原理很简单：选择性富集包含某一特异性抗原的染色体（质）片段。能够识别 某一蛋白或目的修饰蛋白的抗体被用来确定抗原在基因组中一处或多处的相对丰度。 1、分离总染色体 （质）（需要通过交联使目的抗原固定在染色体 （质）与其结合的部位） 。 2、将染色体（质）切割成片段（以提高精度） 。 3、对切成片段的染色体（质）进行免疫沉淀。 4、免疫沉淀的染色体 （质）片段进行分析， 确定靶 DNA序列水平与其输入的染色体 （质） 的相对丰度。 甲醛处理细胞  ---  收集细胞，超声破碎  --- 加入目的蛋白的抗体，与靶蛋白 -DNA 复合物 相互结合 --- 加入 ProteinA ，结合抗体 - 靶蛋白 -DNA 复合物，并沉淀 --- 对沉淀下来的复合 物进行清洗，除去一些非特异性结合 --- 洗脱，得到富集的靶蛋白 -DNA 复合物 --- 解交联， 纯化富集的 DNA-片段 ---PCR 分析。 简述真核生物 5 ’帽子结构和功能。 m是甲基， m7G指 7- 甲基鸟嘌呤核苷酸 m7G是所有 mRNA的帽子都有结构，它跟 5-PPPN 相连（即 mRNA5端起始三磷酸核苷酸） 。帽子结构通常有三种： m7GPPPN， m7GPPPNm，m7GPPPNmNm。它们分别被称为 O型、 I 型和 II 型 mRNA的加工修饰包括： 5‘端形成帽子结构、 3’端加 polyA 、剪接除去内含子和甲基化。 ①在 5’ - 端加帽 成熟的真核生物 mRNA的 5’ - 端有 m7GPPPN结构，称为甲基鸟苷帽子。 它是在 RNA三磷酸酶， mRNA鸟苷酰转移酶， mRNA（鸟嘌呤 -7 ）甲基转移酶和 mRNA（核苷 - 2’） 甲基转移酶催化形成的。甲基化程度不同可形成 3 种类型的帽子： CAP0 型、 CAP I 型和 CAP 型。鸟苷