2020第二节细菌涂片制备及染色.ppt

实验二 细菌的涂片及染色 1. 目的要求 2. 染色剂及染色原理 3. 实验材料 4. 实验步骤 5. 思考题 本次实验内容 一、目的要求 ①学习细菌涂片的基本技术 ②掌握细菌的简单染色和革兰氏染色法 二、微生物染色的基本原理 借助物理和化学因素的作用而进行 1 、 物理因素 如：细胞及细胞物质对染料的毛细 现象、渗透、吸附作用等。 2 、 化学因素 如：正负离子之间的相互吸引等 染色剂，按其电离后所带电荷的性质分： 1 、酸性染料 酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑 2 、碱性染料 碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、 甲基紫等，细菌易被碱性染料染色 3 、中性染料： 伊红、美兰等， Wright 染料和 Gimsa 染料等 （常用于细胞核染色） 4 、单纯染色： 这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物， 不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类的染料。 三、实验材料 ①菌种 牙垢细菌；大肠杆菌 24 h 培养液； 枯草杆菌 12 h 培养液 ②载玻片 、接种环、镊子、酒精灯、染色液、火柴 ③显微镜 、吸水纸、酒精乙醚溶剂 四、实验步骤 ( 一 ) 细菌染色方法 1 ．单染色法：用一种染色液染菌体后，就可以观察微 生物的大小、形状、和细胞排列状况，但不能鉴别 微生物及它的特殊构造 2 ．复染色法：用两种或两种以上染色液进行，常用： 革兰氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、鞭毛染 色法、细胞染色法等 染色技术：涂片 —— 干燥 —— 固定 —— 染色 —— 媒 染 —— 脱色 —— 复染 —— 水洗 —— 干燥 —— 镜检 四、实验步骤 ( 二 ) 牙垢细菌单染色法 ①菌种：牙垢细菌 ②涂片 ③干燥：自然气干或酒精灯高处微微加热 ④固定 ⑤染色：在整个涂面上滴加石碳酸复红，染色 1 min ⑥水洗：倾去染液，用自来水细流冲洗至流下水中无 染料颜色为止 ⑦干燥：空气中自然干燥 ⑧镜检：在油镜下观察牙垢中的各种细菌形态并绘图 示范照片 简单染色视频 四、实验步骤 ( 三 ) 革兰氏染色法 革兰氏染色是 Gram 发明的一种细菌鉴别染色法， 通过染色，可将细菌分为两大类：一类被染成紫色，称 为革兰氏阳性细菌，另一类被染成红色，称为革兰氏阴 性细菌。这种染色的结果主要与细菌的细胞壁结构和化 学组成有关。 步骤 ①涂片 ②初染 ：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液， 染 1 min ，倾去染液，流水冲洗至无紫色 媒染：先用新配的碘液冲去残水，而后用其覆 盖涂面 1 min ，后水洗 ③脱色 ：除去残水后，滴加 95% 酒精进行脱色约 30 sec ，后立即用流水冲洗 ④复染 ：滴加番红染色液，染 1 min ，水洗后用吸 水纸吸干 ⑤镜检 ：观察染色结果并绘图