生物制药与药品检验技术 好技术，有出处—分光光度技术的基本应用 课件：分光光度技术的基本应用.pptxVIP

生物制药与药品检验技术宁波职业技术学院Biopharming and Drug Test Technology项目一 血清蛋白类药物的原料制备与分析检验Preparation and analysis of raw materials for serum protein drug分光光度技术的基本应用主讲教师：汤晓学习内容：（1）分光光度技术的基本原理（2）分光光度计的基本结构（3）分光光度技术的两个应用 学习重点：分光光度技术的两个应用一、分光光度技术的基本原理 朗伯－比尔（Lambert-Beer）定律 比色分析的基本原理：研究有色溶液对单色光的吸收程度与溶液及液层厚度间的定量关系吸光度与溶液的浓度和液层的厚度的乘积成正比 二、分光光度计的基本结构由五部分组成：光源、单色器、狭缝、样品池、检测器系统 分光光度计的基本结构①光源：能提供所需波长范围的连续光谱，稳定，有足够强度常用：白炽灯（钨灯、卤钨灯等），气体放电灯（氢灯、氘灯、氙灯等），金属弧灯（各种汞灯）等钨灯和卤钨灯：发射320～2000nm连续光谱，最适宜工作范围为360～1000nm，稳定性好，用作可见分光光度计的光源，灯管发黑及时更换；氢灯和氘灯：发射150～400nm的紫外光，可用作紫外分光光度计的光源，接触灯管应戴手套②分光系统（单色器）：能从混合光波中分解出来所需单一波长光的装置，由棱镜或光栅构成。用玻璃制成的棱镜色散力强，但只能在可见光区工作；石棱镜工作波长范围为185～4000nm，在紫外区有较好的分辨力，也适用于可见光区和近红外区。③狭缝：是指由一对隔板在光通路上形成的缝隙，用来调节入射单色光的纯度和强度，也直接影响分辩力狭缝可在0－2mm宽度内调节，由于棱镜色散力随波长不同而变化，较先进的分光光度计的狭缝宽度可随波长一起调节④比色皿：比色杯、样品池、吸收器，用来盛溶液，比色皿壁厚度等规格应尽可能完全相等，否则将产生测定误差玻璃比色皿只适用于可见光区，在紫外区测定时要用石英比色皿不能用手指拿比色皿的光面，用后要及时洗涤，可用温水或稀盐酸，乙醇以及铬酸洗液（浓酸中浸泡不要超过15分钟），表面只能用柔软的绒布或拭镜头纸擦净⑤检测器系统：检测器产生的光电流以某种方式转变成模拟的或数字的结果，模拟输出装置包括电流表、电压表、记录器、示波器及与计算机联用等，数字输出则通过模拟／数字转换装置如数字式电压表等分光光度计 三、分光光度技术的两个应用①测定溶液中物质的含量 I. 测定标准溶液（standard solution）（浓度已知）和未知液（浓度待测）的吸光度 (A value)，进行比较，可得出未知液的浓度（concentration）（前提：所用比色皿的厚度一样）II. 先测出不同浓度的标准液的吸光度，绘制标准曲线（standard curve），再测定未知液的吸光度，从标准曲线上查到对应的浓度。所用波长通常要选择被测物质的最大吸收波长（absorption wavelength）：⑴灵敏度大；⑵可以避免其它物质的干扰。②用紫外光谱（ultraviolet spectrum）鉴定化合物各种物质有它自己的吸收光谱曲线，因此用吸收光谱曲线图可以进行物质种类的鉴定。金银花苷的紫外光谱扫描注意：同一物质的紫外吸收光谱应完全一致，但具有相同吸收光谱的化合物结构不一定相同。除特殊情况外，单独依靠紫外吸收光谱决定一个未知物结构，须与其它方法配合。应用：主要用于已知物质的定量分析（quantitative analysis）, 和纯度分析（purity analysis）。总结：分光光度计的基本应用分光光度技术的基本原理朗伯比尔定律分光光度计的基本结构光源、单色器、狭缝、样品池、检测器系统分光光度技术的两个应用测定物质的含量、鉴定化合物（紫外光谱）亮亮图文旗舰店