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DNA提取中各种实验试剂作用原理 1、STE 是 Tris-Hcl 、EDTA、Nacl 的混合液 。其总体作用是为 DNA提供保护环境，在此环 境下 DNA可以呈稳定态，最少限度地受到破坏。 Tris.HCl 提供缓冲体系， DNA在这一体系中呈稳定态。 EDTA：是 DNA酶的抑制剂，可以防止细胞破碎后 DNA酶降解 DNA。 NaCl，有利于 DNA的溶解。 2、SDS的作用：利用高浓度的阴离子去垢剂 SDS（十二烷基磺酸钠， Sodium dodecyl sulfate ） 使 DNA 与蛋白质分离，在高温（ 55～ 65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性， 释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉 淀，离心后除 去沉淀， 3、苯酚的作用：使蛋白质变性，同时抑制了 DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由 于蛋白与 DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子 溶于酚相，而 DNA溶于水相。 使用酚的优点：  1. 有效变性蛋白质；  2. 抑制了  DNase的降解作用。 缺点：  1.  能溶解  10-15%的水，从而溶解一部分  poly  （ A） RNA。 2.  不能完全抑制  RNase的 活性。 Tris 酚的颜色，一般为黄色。如果变成粉红色，说明被氧化，不能再用。 4、氯仿的作用 克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。 （酚易溶于氯仿中） 5、异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少 气泡产生。 另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含 DNA的水相、 中间的变性蛋白相及 下层有机溶剂相维持稳定。 6、用乙醇沉淀 DNA时，为什么加入单价的阳离子？ 用乙醇沉淀 DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如 NaCl 或 NaAc ，Na+中和 DNA分 子上的负电荷，减少 DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。 7．为什么在保存或抽提 DNA过程中，一般采用 TE 缓冲液？ 在基因操作实验中， 选择缓冲液的主要原则是考虑 DNA的稳定性及缓冲液成分不产生干扰作 用。磷酸盐缓冲系统（ pKa＝ 7.2 ）和硼酸系统（ pKa=9.24 ）等虽然也都符合细胞内环境的生 理范围  (pH) ，可作  DNA的保存液，但在转化实验时，磷酸根离子的种类及数量将与  Ca2＋产 生 Ca3(PO4)2 沉淀，在  DNA反应时， 不同的酶对辅助因子的种类及数量要求不同，  有的要求 高离子浓度，有的则要求低盐浓度，采用 Tris-HCl （ pKa=8.0 ）的缓冲系统，由于缓冲液是 TrisH+/Tris  ，不存在金属离子的干扰作用，故在提取或保存  DNA 时，大都采用  Tris-HCl 系统，而  TE 缓冲液中的  EDTA更能稳定  。 8、STE 是  Tris-Hcl  、EDTA、Nacl  的混合液  。其总体作用是为  DNA提供保护环境，在此环 境下 DNA可以呈稳定态，最少限度地受到破坏。 Tris.HCl 提供缓冲体系， DNA在这一体系中呈稳定态。 EDTA：是 DNA酶的抑制剂，可以防止细胞破碎后 DNA酶降解 DNA。 NaCl，有利于 DNA的溶解。 9、SDS的作用：利用高浓度的阴离子去垢剂 SDS（十二烷基磺酸钠， Sodium dodecyl sulfate ） 使 DNA 与蛋白质分离，在高温（ 55～ 65℃）条件下裂解细胞，使染色体离析，蛋白变性， 释放出核酸，然后采用提高盐浓度及降低温度的方法使蛋白质及多糖杂质沉 淀，离心后除 去沉淀， 10、苯酚的作用：使蛋白质变性，同时抑制了 DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由 于蛋白与 DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子 溶于酚相，而 DNA溶于水相。 使用酚的优点：  1. 有效变性蛋白质；  2. 抑制了  DNase的降解作用。 缺点：  1.  能溶解  10-15%的水，从而溶解一部分  poly  （ A） RNA。 2.  不能完全抑制  RNase的 活性。 Tris 酚的颜色，一般为黄色。如果变成粉红色，说明被氧化，不能再用。 11、氯仿的作用 克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。 最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。 （酚易溶于氯仿中） 5、异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少 气泡产生。 另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含 DNA的水相、 中间的变性蛋白相及 下