2020血清蛋白质浓度定量测定.pptVIP

BCA 法定量蛋白质浓度 ? BCA 法是近来广为应用的蛋白定量方法。 ? 操作简便，快速，灵敏度高，准确，试 剂稳定性好，经济实用，抗干扰能力强 【原理】：碱性条件下，蛋白将 Cu 2+ 还原为 Cu + ， Cu + 与 BCA 试剂形成紫颜色的络合物， 测定其在 562nm 处的吸收值，并与标准曲 线对比，即可计算待测蛋白的浓度。 【原理】： 基本原理 ? BCA(bicinchoninic acid) 法蛋白浓度定 量： ? 在碱性环境下蛋白质与 Cu 2+ 络合并将 Cu 2+ 还原成 Cu + （ biuret reaction ）。 BCA 与 Cu + 结合形成稳定的紫蓝色复合物， 在 562 nm 处有高的光吸收值并与蛋白质 浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。 ? 【试剂】 ? 1 、 试剂 A ： ? 分别称取 10g BCA 二钠盐、 20g 无水碳酸 钠、 0.16g 酒石酸钠、 4g 氢氧化钠 、 9.5g 碳 酸氢钠，混合调 PH 值至 11.25 ，加水至 1L 。 ? 2 、 试剂 B ： 4 ％硫酸铜。 ? 3 、 BCA 工作液： ? 试剂 A 100ml ＋ 试剂 B 2ml 混合。 操作步骤 ? 1. 先将 solutionA 摇晃混匀