2020第十一章荧光分析法2.pptVIP

第十一章 荧 光 分 析 法 本章基本要求： ⒈理解分子荧光的基本原理； ⒉理解分子荧光激发光谱、发射光谱的含义； ⒊掌握分子荧光发射光谱的特征； ⒋了解荧光光谱仪的组成及部分作用； ⒌掌握荧光分析法的主要应用范围。 第一节荧光分析法的基本原理 一、分子荧光 ㈠分子荧光的产生 分子吸收电磁辐射后处于激发态，激发态分子经 历碰撞及发射的去激发过程。 一般用 Jablonski 能级图来定性描述分子吸收和 发射过程。 ⒈分子的电子能级与激发过程 物质的分子体系中存在着电子能级、振动能级和 转动能级。由于一般的光谱仪器分辨不出转动能 量，因而 Jablonski 能级图中未画出转动能级。 ? 若分子的电子数是偶数，则分子中电子净的 自旋之和为 S=0 ，即基态分子的电子是自旋成对 的。 由分子多重性的定义有 M =2S+1=1, 称之为单 重态。 基态单重态以 S 0 表示， S 1 和 S 2 则分别代表分 子的第一和第二激发单重态。 当分子处于激发态时，若分子的电子自旋与 基态相同，仍然是单重态，即分子处于 S 1 和 S 2 。 ? 在激发态中，分子的某个电子也有可能改变自 旋，即自旋平行则 S=1 ，所以多重性 M=2S+1=3, 分子 处于这样的激发态称为三重态， 图中最低三重态以符号 T 1 表示， T 2 代表较高的激 发三重态。 由于自旋平行比自旋配对的状态更稳定，故三重 态的能级比单重态的能量略低。 每个电子能级都有多个振动能级，在同一个电子 能级中，最低的线代表该能级的振动基态。 吸收过程发生在 10 -15 s 左右的时间内。 分子吸收和发射过程的 Jablonski 能级能级图 S 0 3 2 1 0 3 2 1 0 T 2 S 1 3 2 1 0 2 1 0 4 3 2 1 0 S 2 T 1 λ 1 λ 2 λ 3 λ 4 吸收 吸收 荧光 磷光 ⒉分子的去激发过程 分子被激发到较高的能级后不稳定，将以不同 途径释放多余的能量回到基态，该过程为分子的去 激发过程。去激发包括下面几个可能的途径。 ⑴振动弛豫 在凝聚相体系中，被激发到激发态的分子通过 与溶剂分子的碰撞迅速以热的形式把多余的振动能 量传递给周围的分子，而自身返回该电子能级的最 低振动能级，这一过程称为振动弛豫。 振动弛豫过程发生大约为 10 -12 s 。 ⑵内部能量转换 当 S 2 的较低振动能级与 S 1 的较高振动能级的 能量相当或重叠时，分子有可能从 S 2 的振动能级 以无辐射方式过渡到 S 1 的能量相等的振动能级上 该过程为内部能量转换。 内转换发生的时间约为 10 -12 s 。 内转换过程同样也发生在激发三重态的电子能 级间。 由于振动弛豫和内转换过程极为迅速 ( 10 -12 s), 因此，激发后的分子很快回到第一激发单重态 S 1 的最低振动能级。所以高于第一激发态的荧光发 射十分少见 。 ⑶荧光发射 当分子处于第一激发单重态 S 1 的最低振动能 级时，分子可能通过发射光子跃迁回到基态 S 0 的 各振动能级上，这个过程称为荧光发射。 荧光发射过程约为 10 -8 s. ⑷外部能量转换 激发态分子与溶剂和其它溶质分子间的相 互作用及能量转换等过程称为外部能量转换。 外转换过程是荧光或磷光的竞争过程，因该 过程发光强度减弱或消失，该现象称为“猝灭” 或 “熄灭 ”。 ⑸体系间跨越 系间跃迁是不同多重态之间的一种无辐射跃迁 该过程是激发态电子改变其自旋态，是分子的多 重性发生变化的结果。 当两种能态的