分析化学柱色谱法.pptVIP

LOGO 柱色谱 液-液分配柱色谱法 柱色谱法 吸附柱色谱法 分配柱色谱法 离子交换柱色谱法 凝胶柱色谱法 柱色谱法 绿色叶子提取液 样品 石油醚 流动相 叶绿素a 叶绿素b 叶黄质 胡萝卜素 回顾：吸附色谱过程 色谱柱 碳酸钙 固定相 流动相带动样品分子运动 固定相阻碍样品分子运动 不同样品分子——运动速度不同——样品分离——形成色带 极性弱跑的快 吸附色谱中 固定相极性强 流动相极性弱 相似相溶 极性强跑的慢 难以解决的问题 吸附剂 极性强 有机酸 多元醇 强烈吸附无法洗脱试验失败！ 极性特别强的物质在吸附色谱中运动速度很慢 强极性 跑步不行 吸附色谱慢 如何解决？ 换个比赛方式——游泳 ？ 液-液分配柱色谱法 （一）分离原理 液-液分配柱色谱法中的流动相是液体，固定相也是液体（又称固定液）。 液-固吸附柱色谱法中的流动相是液体，固定相是固体吸附剂。 ——游泳池 ——跑道 吸附剂 固定液 当流动相携带样品流经固定相（吸附剂）时，由于混合物中各组分的被吸附能力不同，各组分能够被分离——跑步 ——游泳 原理：吸附 原理： 连续萃取 固定相为固体，极性大于流动相 固定相也为液体，极性可能大于也可能小于流动相。 液-液分配柱色谱 液-固吸附柱色谱 当流动相携带样品流经固定相（固定液）时，由于混合物中各组分在互不相混溶的溶剂中溶解性不同，各组分能够被分离 分配 色谱 正 相 反 相 固定相极性流动相极性 非极性样品跑的快（易溶于流动相） 固定相极性流动相极性 极性样品跑的快（易溶于流动相） 与液固色谱类似但是吸附能力更弱 多元醇 有机酸 吸附剂 强极性物质如何分离？ 极性强 难以洗脱 极性相对较弱，反相色谱则是弱极性 可以洗脱，甚至反相色谱中跑的最快 （二）载体和固定液 载体又称担体，（也称填充料）它是一种惰性物质，不具吸附作用。在分配色谱法中，载体仅起负载或支持固定液的作用。 载体——装水的容器 游泳池、脸盆 吸附剂——硅胶 当硅胶上吸附的“自由水”的含量大于17%时，则吸附性能极弱。此时，硅胶上吸附的大量水分可以作为液-液分配色谱的固定相来看待。 H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O H2O 固定相 载体 多孔硅藻土 纤维素粉 滤纸 烷基化硅胶（如ODS） 常用载体 在反相高效液相色谱法中，常用的固定相是 A.硅胶 B.氧化铝 C.十八烷基硅烷键合硅胶（ODS） D.甲醇 E.水 执业药师考题 √ 正相：水，稀H2SO4、甲醇、甲酰胺 强极性溶剂 反相：石蜡油、硅油 非极性或弱极性液体。 固定相 （三）流动相 固定相 流动相 固定相与流动相应该互不相溶。否则固定相会被流动相带走 相似相溶——不似不溶 两者极性应相差很大 （四）操作方法 1．装柱要求: 装柱前需先将固定液与担体充分混合。 装柱 加样 洗脱 载体 载体 载体 固定液 固定液 固定液 固定液 2．洗脱剂必需事先用固定液饱和。 不溶≠ 完全不溶解 溶解量极少 当洗脱剂不断流过固定液时仍然会把担体上的固定液逐步溶解、带出色谱柱——千里之堤溃于蚁穴 装柱 加样 洗脱 色谱分离失败 解决方法：事先饱和——先将蚂蚁喂饱 固定相 流动相 小结 新概念——载体 新操作——两合：混合、饱和 小结 新分类——两相：正相和反相 新原理——连续萃取 小结 新知识 LOGO