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- 2020-12-18 发布于天津
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蛋白印迹实验报告
篇一:实验十二 Western 印迹鉴定 目标蛋白
实验十二 Western 印迹鉴定目标蛋 白
实验目的
了解 Western blot 的原理及其意 义,掌握 Western blot 的操作方法;
应用 Western blot 技术分析鉴定 经 SDS分离后转移到尼龙膜上的 重组蛋白。
实验原理
Western印迹法简称蛋白质印迹法。 蛋白质样品经 SDS电泳后, 凝胶 所含的样品蛋白质区带通过电泳方法转 移、固定到载体(如尼龙膜、硝酸纤维 素膜)上,固相载体以非共价键的形式 与蛋白质结合,从而固定住蛋白质;以 膜上的蛋白或多肽为抗原,与相应的第 一抗体起免疫反应,再和酶标记或同位
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素标记的第二抗体反应,用适当的溶液 漂洗去未结合抗体后,置含底物的溶液 中温育,或通过放射自显影显出谱带, 即可检测出样品中的特异蛋白组分。
试剂与器材
试剂
1. 转 移 缓 冲 液 : 甘 氨 酸 ( 39 mmol/L ), Tris 碱( 48mmol/L ), SDS ( %), 200ml 甲醇 ( 20%), 定容至 1,000mL;
2.封闭液: 5% 脱脂奶粉, % 叠
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