实验二蛋白质及氨基酸酸显色反应.pptVIP

实验二、蛋白质及氨基酸 的显色反应 Department of life science  实验二、蛋白质及氨基酸的显色反应 今目的和要求 1学习和了解常用的几种鉴定蛋白质与氨基 酸的方法 2进一步认识氨基酸是蛋白质的基本组成 单位。  I、双缩脲反应( Biurea reaction) ◆原理 双缩脲反应:在碱性条件下,双缩脲与二价铜离 子作用,生成紫红色配合物的反应。当加热至 180℃左右时,两分子尿素缩合脱去一分子氨, 生成双缩脲。在肽和蛋白质分子中具有肽键,其 结构与双缩脲类似。也能发生此反应,生成蓝紫 性域坐,此风所广盖领色的泽线与需白 质的浓度成正比,而与蛋白质分子量及氨基酸成 分无关。  NH NH NH+NHs↑ 18 紫红色铜双缩脲复合物分子结构为: H HC=O N CH-R C R-CH H CH-R  操作步骤 取少量尿素结晶.放入干燥试管中,用微火加 热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时,停止加 热,尿素放出氨,形成双缩脲。冷却后,加 10%NaOH溶液约1mL,振荡混勻,再加入 1%CusO4溶液1滴,振荡之。观察出现的粉红颜 色。(避免添加过量硫酸铜,生成的蓝色氢氧化 铜能掩盖粉红色)。 取另一支试管,加1mL蛋白质溶液和10%氢氧 化钠溶液2癿L,摇勻,再加1%硫酸铜溶