杨树SPR1互作蛋白的鉴定及功能初探.pdfVIP

摘要 摘要 微管由 α-微管蛋白和 β-微管蛋白以异二聚体的形式聚合而成，与微丝和中间纤 维共同组成了细胞骨架。微管在植物细胞形态、植株生长发育、木材形成和抗逆等方 面具有重要作用。微管列阵的动态变化与功能受到微管蛋白和微管结合蛋白的调控。 SPR1 蛋白是植物特有的一种微管结合蛋白，各项研究表明 SPR1 参与调节周质微管 列阵的排列，从而对植物细胞的生长方向产生影响，并促进盐胁迫下微管的解聚，提 高植物对盐胁迫的耐受性。目前对林木微管蛋白功能的研究鲜有报道，特别是微管调 控林木形态与材性的分子机制的研究尚属空白，且关于林木SPR1 蛋白的功能及其对 微管的调控机制尚不明确。 为获得观察微管形态的活体材料，本研究以毛果杨微管蛋白Pt TUA5 和Pt TUB16 基因序列为模板设计引物，同源克隆得到了84K 杨的84KTUA5 和84KTUB16 基因序 列，分别构建84KTUA5 和84KTUB16 与红色荧光蛋白mCherry 融合的四种植物过表 达载体，经过烟草瞬时表达验证后转化84K 杨；以毛果杨SPR1 基因序列为模板设计 引物，对84K 杨的84KSPR1 基因进行同源克隆，通过酵母双杂交技术筛选84KSPR1 的候选互作蛋白，利用BiFC 技术验证 84KSPR1 与其候选互作蛋白的相互作用，并 探究84KSPR1 互作蛋白之间的相互作用。主要结果如下： 1．成功获得了稳定遗传的12 个84KTUA5 转基因株系和24 个84KTUB16 转基 因株系，为进一步研究杨树微管功能提供了背景材料。 2 ．通过酵母双杂交技术筛选到 11 个 84KSPR1 候选互作蛋白。通过BiFC 发现 其中10 个蛋白可以与84KSPR1 产生互作，其中IQD14 蛋白与84KSPR1 的相互作用 位点在微管列阵上。此外对84KSPR1 互作蛋白之间的相互作用也进行了BiFC 验证， 发现EF 1A 、HIR1 、DRM4 两两之间都没有相互作用，而IQD14 分别与EF1A 、HIR1 和DRM4 之间产生互作，根据前人的研究，作者推测IQD14 可能与CaM 和84KSPR1 形成多聚蛋白复合物调节彼此的活性，并可能介导了 84KSPR1 与其他互作蛋白 （EF1A 、HIR1 、DRM4 等）之间的相互作用，从而调控微管列阵的动态变化。 本研究为探究林木SPR1 蛋白的功能及微管调控机制提供了新的线索。 关键词：微管，α-微管蛋白，β-微管蛋白，微管结合蛋白SPR1 ，蛋白质相互作用 I 杨树SPR1 互作蛋白的鉴定及功能初探 缩略词与专有名词明细 缩略词与 英文全名 中文全名 专有名词 Amp Ampicillin 氨苄青霉素 ASG Acetosyringone 乙酰丁香酮 BiFC Bimolecular fluorescence complementation 双分子荧光互补 BLAST Basic Local Alignment Search Tool 局部相似性基本查询工具 bp Base pair 碱基对 ddH O Double distillation H O 双蒸水 2 2 DEPC Diethyl pyrocarbonate 焦磷酸二乙酯 dNTPs Deoxynucleotide triphosphates 脱氧腺苷三磷酸 EB Ethidium bromide