白杨六倍体诱导及其性状变异分子机理研究.pdfVIP

摘要 摘要 植物多倍体中存在比原株生长快且健壮和缓慢且矮小的两种类型。开展多倍体营 养生长性状形成的分子基础研究，对于推动植物多倍体育种理论和技术进步具有重要 意义。本论文以 ‘北林5 号杨’[(Populus alba ×P.glandulosa) ×P. tomentosa]为 材料建立了高效的离体组培快繁体系，在此基础上通过施加一定浓度的氨磺乐灵处理 离体茎段诱导体细胞染色体加倍获得了白杨六倍体，进而以六倍体和三倍体为材料， 对其生长发育特性及不同叶序的叶片转录组和miRNA 进行分析，主要结论如下： 1 5 （）建立了 ‘北林 号杨’叶片、叶柄和根的组培再生快繁体系。研究表明叶片 及叶柄再生能力远优于根，其中 ‘北林5号杨’叶片不定芽再生的适宜培养基为 MS+0.1mg/L6-BA+0.15mg/LNAA+0.02mg/LTDZ，在该培养基下不定芽诱导率可达 95% ，平均再生芽数为7.77 ；叶柄不定芽再生的适宜培养基为MS+0.2mg/L 6-BA+0.05mg/LNAA+0.01mg/LTDZ，在该培养基下不定芽诱导率可达95%，平均再 生芽数为8.15 ；根不定芽再生的适宜培养基为MS+0.3mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+0.02mg/LTDZ，在该培养基下不定芽诱导率达60%，平均再生芽数为2.82。 （2）施加氨磺乐灵处理 ‘北林5 号杨’离体茎段诱导不定芽染色体加倍获得了 5 MS+0.1mg/L 白杨六倍体植株。筛选出‘北林 号杨’茎段不定芽诱导的适宜培养基为 6-BA+0.11mg/LNAA，诱导率达93.33%、平均再生芽数达7.55个。采用氨磺乐灵溶 5 6 液浸泡法对 ‘北林 号杨’离体茎段进行染色体加倍处理，成功的得到了 株白杨六 19.35% 5mg/L 5mm 72h 倍体，平均诱导率达 。其中用 的氨磺乐灵浸泡 长的茎段 ，以 及采用5mg/L 的氨磺乐灵浸泡10mm 长的茎段24h，是最佳的六倍体诱导处理条件组 合。 （3）白杨六倍体属于生长发育缓慢且矮小的多倍体类型。与三倍体相比，白杨 六倍体叶片细胞更大、而细胞数量、叶面积及株高生长速率较小。白杨六倍体的第 3-13 叶位叶片光合速率比同叶位三倍体依次增加78.83~2.78%，但随着叶片叶龄的增 加，六倍体第 14-20 叶位叶片光合速率迅速下降，比同叶位叶片的三倍体依次减少 3.33~53.55%。此外，六倍体叶绿素含量和类胡萝 卜素含量也均表现出随着叶龄的增 大而迅速下降的趋势，显著低于同叶位的三倍体。叶绿体电镜超微结构发现六倍体第 I 白杨六倍体诱导及其性状变异分子机理研究 17 叶位叶片的叶绿体结构紊乱，类囊体片层扭曲且排列松散，而三倍体第17 叶位叶 片叶绿体膜结构清晰完整，基粒类囊体垛叠整齐紧密。 4 （）白杨六倍体激素信号转导相关差异基因表达随叶片发育而表现出规律性变 化。与IAA 信号转导负相关的GH3 的上调DEGs 数量逐渐增多；与CTK 信号转导 B-ARR DEGs ET CTR1 DEGs 正相关的 下调 数量逐渐增多；与 信号转导负相关的 下调 ET ERF DEGs JA 数量逐渐增多；与 信号转导正相关的 上调 数量逐渐增多；与 信号 转导正相关的JA