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分子生物学基础实验 实验一质粒 DNA 的小量制备 一、实验原理 载体 : 要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进 行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具 就叫载体 vector ）.载体的设计和应用是 DNA 体外重组的重要条件 . 作为基因工程的载体必须具备下列条件 :(1 是一个复制子，载体有复 制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖； 2 ）载体在受体细胞中能 大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增； 3 ）载体 DNA 链上有 1 到几个限制性内切酶的单一识别与切割位 点，便于外源基因的插入； 4 ）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因 T cr），抗新霉素基因 Ne r ）等，以此知道它是否已进入 受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来 . 细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一 .b5E2RGbCAP 质粒 plasmid ）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在 1 ～ 120kb 之间，具有双链闭合环状结构的 DNA 分子，主要发现于细菌、 放线菌和真菌细胞中 . 质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保 持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息 . 它可独立游离在细胞 质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而 它控制的许多生物学功能也是