仪器分析技术 薄层色谱分析 薄层色谱操作技术.pptxVIP

薄层色谱操作技术;;一、制板 薄层铺板的厚度及均匀性对样品的分离效果和Rf值的重复性影响极大。 1.软板的制备：直接将吸附剂置于玻璃板上，涂铺成均匀薄层便制成了一块软板。软板简单方便，但易被吹散，现多用硬板； 2.硬板的制备 1)载板； 2)匀浆的制备；3）制板；4）晾干；5）活化 ;3.制板 ①手工铺板 ②机械涂铺法 5）活化： 将晾干的板子放在烘箱中于105～110℃活化0.5～1h，取出，放入干燥器中，备用。一般硅胶活化1h，而氧化铝活化30min即可。 ;二、点样 1、点样操作 点样前，用铅笔在距薄层底端1.5～2.5cm处画一横线，点样管吸取样品后，垂直地下端轻微接触薄层板表面的点样线，使斑点呈圆形。 每次点样后，原点扩散的直径以不超过2～3mm为宜。 若样品浓度较稀，可多点几次，每点一次可借助吹风使溶剂迅速挥发。;2、点样要求 点样的体积要尽可能小些，约2～10 μl。 多个样品在同一薄板的点样线上点样时，它们相互间隔应大于15mm。 点样不能距边太近，以避免边缘效应而产生误差。 点样时间要短，避免薄板暴露在空气中时间过长而吸水降低活性。 ;三、展开 薄层板的展开需要在密闭的层析缸(也可用标本缸或广口瓶等)中进行 缸内溶剂蒸气饱和5～10min 注意控制器皿中展开剂的量，切勿使样点浸入展开剂中 展开剂前沿上升到样点上方8～10cm时取出薄层板，放平，铅笔标明溶剂前沿位置 ;展开注意： 展开剂的饱和度对分离效果影响较大，在饱和情况下，分离效果好，且可消除边缘效应。 边缘效应：指展开时薄板边缘的Rf值高于中部的Rf值的现象 。 在展开过程中最好恒温恒湿 。 ;四、斑点定位 薄层色谱经过一段时间的展开后，对待测组分进行定性定量前都必须确定组分在薄层板上的位置，即定位。 ;1.显色剂法 喷雾法：将显色剂直接由喷雾器喷洒在硬板上，立即显色或加热至一定温度显色。 浸渍法：将薄层板的一端轻轻浸入显色剂中，待显色剂扩散到全部薄层；或者将薄层全部浸入到显色剂中，取出晾干使生成颜色稳定、轮廓清楚、灵敏度高的色斑。浸渍法对软板不适用。;2.光学法 化合物本身是有色物质，在阳光下可直接看出斑点定??； 有些化合物能吸收某种波长的光，发射不同颜色的荧光斑点。 先在日光下观察，找出色斑大概位置，然后在波长为254nm和365nm的紫外灯下观察，以紫外吸收或荧光色斑定位。 光学检出法方便且不会改变化合物的性质。但对光敏感的化合物要注意避光，并尽量缩短用紫外光照射的时间。;谢 谢