食品快速检测技术 2.环介导等温扩增技术（LAMP）简介 环介导等温扩增技术简介 PPT.pptx

环介导等温扩增技术（LAMP）简介主讲：刘伟 食品营养与检测专业教学资源库 一 目录页等温扩增技术简介二LAMP特点三LAMP应用 — 1 — 食品营养与检测专业教学资源库 等温扩增技术简介一1.概念2.优点3.种类4.限量值 — 2 — 食品营养与检测专业教学资源库 1.概念等温扩增技术(Isothermal Amplification Technology)是核酸体外扩增技术，其反应过程始终维持在恒定的温度下，通过添加不同活性的酶和各自特异性引物（或不加）来达到快速核酸扩增的目的。 与PCR技术相比核酸等温扩增对仪器的要求大大简化，反应时间大大缩短，更能满足快速简便的需求。 食品营养与检测专业教学资源库 2.优点特异性高分析速度快成本低突变率低不需要升温降温过程，一台的加热器即可操作检测核酸成分比检测微生物本身危险性小方便诊断 食品营养与检测专业教学资源库 3.种类环介导核酸等温扩增技术（LAMP）滚环扩增技术 RCA单引物等温扩增 SPIA依赖解旋酶的等温扩增技术 HAD链替代扩增 SDA交叉引物扩增技术 CPA核酸依赖性扩增检测技术 NASBA Qβ复制酶反应 食品营养与检测专业教学资源库 各类等温扩增技术的比较温度 ℃引物模板其他NASBA42需要2条RNA反转录酶，RNA酶H，T7RNA聚合酶SPIA421条RNA反转录酶，T7RNA聚合酶HDA37/65需要2条DNA解旋酶，扩增片段小SDA37/65不需要DNALAMP634条DNADNA聚合酶RCA 37-65需要DNAQβ37不需要RNA 食品营养与检测专业教学资源库 LAMP技术 食品营养与检测专业教学资源库 LAMP特点二1.优势2.缺陷 食品营养与检测专业教学资源库 1.优势 LAMP克服了传统PCR反应需要通过反复热变性获得单链模板的缺点，避免了反复升降温的过程，实现了恒温条件下的连续快速扩增，具有更高的灵敏度和扩增效率。操作简单：只需一个水浴锅快速高效：不需要预先的双链DNA热变性．避免了温度循环而造成?的时间损失特异性强：针对靶序列6个区域设计的4种特异性引物。6个区域中任何区域与引物不匹配均不能进行核酸扩增。故其特异性极高。?高灵敏度，对于病毒扩增模板可达几个拷贝，比PCR高出数量级的差异。 食品营养与检测专业教学资源库 2.缺陷所识别的靶位序列长度不得过大，一般在300 bp 以内。因此，无法进行长片段 DNA 的扩增； LAMP 技术具备高灵敏度，对操作要求严格分区，否则极易受到污染而产生假阳性结果； LAMP 的反应结果只有两种即扩增与不扩增，故在产生非特异性扩增时是难以进行后续鉴定的；产物相当复杂，无法进行后续的回收、鉴定、克隆等基因工程操作。 食品营养与检测专业教学资源库 LAMP应用三农业、 养殖行业的致病因素检测食品安全中的病原性危险因素检测，因其快速、高通量、简便疾控系统，突发公共卫生事件的应急检测临床诊断，病原微生物的检测。尚需有药准字的 试剂盒面世 感谢指导 期待合作