仪器分析技术 液相色谱 7.5果汁中糖精钠含量测定.ppt

项目2.3 果汁中糖精钠含量测定 任务引入 市质量局术监督局，为保证食品安全，对部分超市出售的果汁进行抽查，欲检测其中糖精钠含量是否超标，设计一可行的分析方案。 分析检测人员按照检测标准和规范化操作要求，完成糖精钠含量测定并提交检测报告。 液相色谱定义 固定相 将特定的液态物质涂于担体表面 化学键合于担体表面而形成的有机键合层 如C18（十八烷基硅烷）、 C8（辛烷基）、氨基键合硅胶 固定相类型 极性固定相：正相色谱 (固定相极性 流动相极性) 以极性有机基团如胺基（-NH2）、腈基（-CN）、醚基（-O-）等键合在硅胶表面制成的 非极性固定相：反相色谱 (固定相极性 流动相极性) 反相色谱法最常用的固定相是C18、C8和苯基键合相的填料，在分离极性很大的化合物时，也可以采用氨基、氰基等极性基团键合固定相。 使用条件 为控制样品在分析过程的解离，常用缓冲液控制流动相的pH值，但需要注意的是，C18和C8使用的pH值通常为2.5~7.5（2~8）。 太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落。 其他类型色谱法 按分离机制分类： 液固吸附色谱法 离子色谱法 凝胶色谱法（分子排阻色谱法） （空间排阻色谱法） 液固吸附色谱法 固定相：吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度5-10μm 流动相：有机溶剂 适用于分离分子量200-1000的组分，大多数用于 非离子型化合物的分离，常用于分离同分异构体。 固定相:离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架， 在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基 阳离子交换树脂 在表面未端芳环上接上季胺基 阴离子交换树脂 流动相：电解质溶液、有机弱酸或有机弱酸盐溶液 油田水质中的阴离子分析 固定相：薄壳型阴离子交换树脂 (3×250mm) 流动相：0.003mol·L-1 NaHCO3 / 0.0024 mol·L-1?Na2CO3 分离原理 树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的 离子进行可逆交换而分离。 应用 离子交换色谱法主要用于分析阴，阳离子，凡是在溶剂中能够电离 的物质通常都可以用离子交换色谱法来进行分离。 分析物质 有机酸、氨基酸、多肽及核酸。  以凝胶 (gel) 为固定相。它类似于分子筛，但凝胶的孔径比分子筛要大得多。 小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。 常用于分离高分子化合物，如组织提取物、多肽、蛋白质、核酸等。 凝胶色谱（分子排阻色谱法） 油田用驱油剂聚丙烯酰胺损失量的测定 色谱柱：150mm×46mm 固定相：二醇基键合相，孔径200A，粒径5um 流动相:甲醇/0.05mol/LNaH2PO4 在高效液相色谱法作为分离方法中，有80%的物质的分离依靠反相色谱来完成。在反相色谱中，水是常用的流动相弱组分，C18是常用的填充载体，重要的是选择流动相的强组分，常用的强组分有甲醇、乙腈与四氢呋喃。 分离模式的选择 建立一个HPLC方法（续） 任务引领下的知识拓展与深化 建立一个HPLC方法（续） 任务引领下的知识拓展与深化 液相色谱法实例 按固定相与流动相相对极性的不同，液液分配色谱可分为哪两类方法？现在有A、B两物质，极性A＞B，问在两种液液分配色谱上的出峰顺序如何？ 分离下述化合物，宜选用何种色谱方法？ （A）聚苯乙烯相对分子量分布 （B）多环芳烃 （C）氨基酸 （D）Ca2+，Ba2+，Mg2+ 任务引领下的知识拓展与深化 如何选择一个最佳的色谱分离条件，既能达到良好的分离度，又能在短时间内完成分析任务？ 任务引领下的知识拓展与深化 影响分离度的因素1 N: 总的理论塔板数; 柱效 k’: 容量因子 (保留因子), 色谱峰的保留作用 α：??色谱峰的相对分离程度; 选择性作用 等度洗脱的分离度公式 任务引领下的知识拓展与深化 影响分离度的因素2 任务引领下的知识拓展与深化 样品的预处理技术(续） 衍生化 所谓衍生化，就是将用通常检测方法不能直接检测或检测灵敏度比较低的物质与某种试剂（即衍生化试剂）反应，使之生成易于检测的化合物。按衍生化的方法可以分为柱前衍生化和柱后衍生化。按生成衍生物的类型又可分为紫外-可见光衍生化、荧光衍生化、拉曼衍生化和电化学衍化。 衍生化技术不仅使高效液相色谱分析体系复杂化，而且需要消耗时间，增加分析成本，有的衍生化反应还需要控制严格的反应条件。因此，只有在找不到方便而灵敏的检测方法，或为了提高