白喉疫苗工艺流程菌种.docx

V V V V 细菌性疫苗 杨丽华 2011年3月 细菌性疫苗 O 1.死疫苗 2?活疫苗 蛋白类疫苗 Sf■、 Sf ■、 多糖蛋白结合疫苗 国药长春所 国药长春所 国药长春所 国药长春所 膜菌结苗 脑球糖疫 Ac炎多合HT Ac炎多合HT 炎viE嗜菌疫 膜寒揪感杆糖 脑伤F流血多苗 风咳喉伤日苗白破百疫 p苗杆 - 介疫氏寒疾乱苗 七卡鼠布伤痢霍疫 1乱寒伤日苗 4霍伤副百疫 0 百日咳疫苗 ￡ 伤寒疫苗 结合疫苗 白喉疫苗 一、白喉概述 病原学 白喉杆菌的致病力及毒素产生的遗传学 白喉毒素 五、白喉类毒素 六、生产工艺 七、类毒素的质量检定 国药檢春所 白喉疫苗 细菌产生 的外毒素 对心肌损 害 外毒素 对神经 系统损 害 外毒素 对肾脏 损害 主要临床表现为上呼吸道发炎 常常表现在咽部，有时在鼻腔、喉部和气管, ■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■■ 国药长春所 国药长春所 国药长春所 国药长春所 国药长春所 白喉流行特点 传染原：白喉杆菌是严格寄生于人类的细菌 没有中间宿主，病人及带菌者是唯 一的传染原。 2?传播途径：主要是呼吸道飞沫传播，也可通 过被污的器具和食物传播。 =1? ? ?111!3?易感人群：人对白喉普遍易感，新生儿1 =1 ? ? ? 111! 、病原学 、病原学 ◎ 、病原学 、病原学 ◎ 细菌形态白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈棒状，有着色较深的异染颗粒，革兰氏染色阳性,白喉杆菌无动力，无荚 细菌形态 白喉棒状杆菌菌体一端或两端膨大呈 棒状，有着色较深的异染颗粒，革兰 氏染色阳性, 白喉杆菌无动力，无荚 膜，不形成芽雀 白喉棒状杆菌显微镜下形态 国药故春所 药长春所 药长春所 国药长春所 国药长春所 病原学 培养特性 白喉杆菌是需氧菌，最适温度为34?35°Co能分解 葡萄糖、麦芽糖和糊精，产酸不产气，能还原硝酸 盐，不产生眄|嗥，不消化蛋白。 3 ?抵抗力 .白喉杆菌对抗生素有不同程度敏感，对青霉素和 红霉素极敏感。 .对消毒剂抵抗力弱，3%苯酚lOmin可将该菌杀死 ⑶?不耐热，58 °C10mi或100°C lmin即可被杀死。  三、白喉杆菌的致病力及毒素产色致病力 三、白喉杆菌的致病力及毒素产色 自然界中动物不感染白喉，只能在敏感动物中造成 人工感染。猴、马、家兔和豚鼠对白喉敏感实验 室常用的动物是家兔、豚鼠和NIH小鼠。 毒素产生遗传学 ?白旗是由白喉杆菌产生毒性很强的外毒素引起的。 白喉杆菌的产毒基因是由B嗜菌体携带。B嗜菌 体感染无毒白喉杆菌后嗜菌体DNA与细菌DNA整合， 形成溶原性白喉杆菌而获得产毒能力（PW8株目前 用于白喉类毒素生产）。 四、白喉毒素 四、白喉毒素 1=NF白喉外毒素为棒状杆菌B -噬菌体tox基因表达 产物，可与细胞表面的特异性受体结合，干扰蛋 白质的合成，对人和动物都引起致死性毒性， 如心脏、肾上腺、肝、肾、胰及神经组织等均 受到损害。 1= NF 白喉毒素是单一多肽，由560个氨基酸组成， 分子量为62kDa,等电点pH4. 1,在pH6时加热55 °C很快失活。 通过物理和花学方法将其纯化。 国药长春乖 五、 五、白喉类毒素 五、 五、白喉类毒素 国药长春所 —V fait-- 1?温度越高脱毒越快，超过40C影响抗原性, 一般37?38 °Co 2 ?在酸性时脱毒较慢，但游离甲醛含量高，在 保存过程中由于甲醛的继续作用，可导致脱 毒过甚，并影响毒素的稳定性；在碱性时脱 毒快，但抗原性损失较大，一般采用弱碱性。 3 ?甲醛浓度大则脱毒快，但抗原损失大。 类毒素的毒性逆转 易发生毒 性逆转 一—…—一??—一 — —ZZZ 六、白喉疫苗工艺流程 菌种（PW8株） 3?4代 传 发酵罐培养离心￡菌体超/浓缩 34?35°C培养对数生长 末期收获，甲苯杀菌。 收集清液 硫就镀两段盐析 除詁除 氨离子及无菌检査 甲醛液37°C 脱毒试验（家兔） 检定（浓度、纯度、安全等） AKO叭吸附 j 他：疋l女笙、织17「寺丿 国药长春所 ? 「w w i i药埃春廉 i i药埃春廉 药长春所 药长春所 1絮状单位（Lf） 是毒素或类毒素与抗毒素的结合单位，只能代表“量 性。使用抗毒素絮状单位标准品来测定 絮状单位测定 毒素或类毒素与相应抗毒素在适当的含量、比例、温度反 勰蠶魏毂意试管中发生抗原抗体结合产生肉眼 躍抗毒素絮状单位标准品可测定类毒素的絮状单位（Lf 2 纯度：＞1500Lf/mgPN 3安全性试验（豚鼠） 七、类毒素的质量检定4效价测定 七、类毒素的质量检