常用生化试剂作用.docxVIP

常用生化试剂作用： 1、蛋白酶 K：能水解消化蛋白质， 特别是与 DNA 结合的组蛋白， 在尿素和 SDS 中稳定。一般工作浓度是 50—100μg/ml，推荐反应缓冲 液： 50mM Tris-HCl （pH7.5 ）,10mM CaCl2 。 2、SDS ：十二烷基硫酸钠，溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶 解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白， SDS 还能与蛋白 质结合而沉淀。 3、IPTG ：异丙基 -β-D-硫代半乳糖苷， 常用于蓝白斑筛选及 IPTG 诱导的细菌内的蛋白表达等。 IPTG 和乳糖的结构相似，所以它和乳 糖一样，可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合， 使阻遏蛋白的空间构像 变化，四聚体解聚成单体， 失去与操纵子特异性结合的能力，从而解 除了阻遏蛋白的作用，使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。 与乳糖不同的是， IPTG 不被 β-半乳糖苷酶水解。常与 X-GAL 一起 用于蓝白斑筛选。作用极强的诱导剂，不被细菌代谢而十分稳定。 4、X-gal ：5-溴-4- 氯-3-吲哚 -β-D- 半乳糖苷，是 IPTG 的显色试剂， 在 IPTG 的催化下显蓝色。常跟 IPTG 一起用与蓝白斑筛选。 5、G418 ：一种抗生素，对几乎所有的细胞都有毒性，是稳定转染最 常用的选择试剂。当 neo 基因被整合进真核细胞基因组合适的地方 后，则能启动 neo