残留消毒剂化学中及法的鉴定试验.docxVIP

残留消毒剂化学中和法的鉴定试验 （1）目 的 本鉴定试验只在确定所选中和剂是否适用于拟进行的细胞感染法病毒灭活试验。 （2）试验设计原则 1） 通过所设各组试验结果综合分析， 应可确定所用中和剂是否对测试消毒药物有良好的中和作用， 对试验用病毒和细胞株是否有害或不良影响。 2） 根据试验目的，选择适宜的病毒株和细胞株。 3） 中和试验用药物浓度应为正式消毒试验最高浓度。 作用时间最短不得少于 30s。 （3）试验分组 在使用细胞感染法进行病毒灭活试验时， 对所用中和剂的鉴定， 应进 行以下各组试验。其中，先进行预备试验中的第 1 组～ 3 组试验， 如中和剂与中和产物对细胞生长无影响，再进行以下的正式试验。 预备试验 : 1）中和剂 + 细胞 → 培养 观察所用中和剂对细胞的生长有无影响。 2）（消毒剂 + 中和剂） + 细胞 → 培养 观察中和产物溶液对细胞生长有无影响。 3）（消毒剂 + 细胞）→培养 观察消毒剂对细胞生长有无影响。 正式试验 : 1）消毒剂 + 病毒悬液 → 接种细胞培养 观察所试消毒剂对病毒有无抑制或灭活作用。 2）（消毒剂 + 病毒悬液） + 中和剂 → 接种细胞培养 观察残留消毒剂被去除后，病毒是否可恢复对细胞的感染作用。 3）中和剂 + 病毒悬液 → 接种细胞培养 观察中和剂对病毒有无抑制作用。 4）（消毒剂 + 中和剂） + 病毒悬液 → 接种细胞培养 观察中和产物，或未被完全中和的残留消毒剂对病毒有无抑制作用或 对检测方法有无干扰。 5）病毒悬液 → 接种细胞培养 观察病毒是否可正常生长，并将其结果作为阳性对照值。 6）未接种病毒的细胞 → 培养 观察其生长是否正常。 4）病毒悬液定量法中和剂鉴定试验操作程序 根据试验分组，准备足量有关器材，依次摆放，进行编号。各组分别用适宜大小容量的无菌定量吸管按以下程序吸取或添加试剂和试验样本。各组每吸一次试剂或样本， 即应更换一次吸管或微量移液器吸头，以防相互污染。 1）预备试验第 1 组。 将试验用细胞，分别加入不同稀释度的中和 剂溶液，作用 3 h～4h 后，吸去液体，另加细胞维持培养液， 置 37℃ 二氧化碳培养箱中培养。 2）预备试验第 2 组。将试验用细胞， 分别加入不同稀释度中和产 物溶液作用 3h～4h 后，吸去中和产物溶液，另加细胞基础培养液， 置 37℃ 二氧化碳培养箱中培养。 3）预备试验第 3 组。将试验用细胞，分别加入不同稀释度的消毒剂， 作用 3h ～4h 后，吸去消毒剂，另加细胞维持培养液，置 37℃ 二氧 化碳培养箱中培养。 4）正式试验第 1 组。吸取双倍浓度消毒剂溶液 0.5 ml 于试管内， 置 20℃± 1℃ 水浴中 5 min 后，吸加 0.5 ml 病毒悬液，混匀。待作用至试验预定的灭活病毒时间， 加入 1.0ml 去离子水，根据试验规定量，吸取该最终样液 （或以对病毒无害的稀释液作系列稀释），进行随后的病毒滴度测定。 5）正式试验第 2 组。吸取双倍浓度消毒剂溶液 0.5 ml 于试管内， 置 20℃± 1℃ 水浴中 5min 后，再吸加 0.5ml 病毒悬液，混匀。待作用至试验规定的灭活病毒时间，加入 1.0ml 中和剂溶液，混匀，作用 10min 。进行随后的病毒滴度测定。 6）正式试验第 3 组。吸取 0.5 ml 去离子水于试管内， 置 20℃± 1℃ 水浴中 5 min 后，再吸加 0.5 ml 病毒悬液，混匀。待作用 10 min，加入 1.0 ml 中和剂溶液，混匀。进行随后的病毒滴度测定。 7）正式试验第 4 组。吸取双倍浓度消毒剂 0.5 ml 于试管内，置 20℃± 1℃ 水浴中 5 min 后，加入 1.0ml 中和剂，再吸加 0.5ml 病毒悬液，混匀，作用 10min 。进行随后的病毒滴度测定。 8）正式试验第 5 组。吸取去离子水 1.5 ml 于试管内，置 20℃± 1℃ 水浴中 5 min 后，再吸加 0.5 ml 病毒悬液，混匀。进行随后的病毒滴度测定。 9）正式试验第 6 组。将试验用细胞， 加细胞维持培养液后， 置 37℃ 二氧化碳培养箱中培养。 10）本试验中对各种病毒的接种和检测操作技术，若无特殊要求，按 病毒学中各种病毒的常规培养和检测方法进行即可。 5）评价规定 试验结果符合以下全部条件，所测中和剂可判为合格 : 1）正式试验中第 1 组无试验病毒，或仅有少量试验病毒生长。 2）正式试验中第 2 组有较第 1 组显著为多，但较第 3 、4、5（组） 显著为少的试验病毒生长。 3）正式试验中第 3 、4、5（组）病毒生长与原接种量相近。 4）正式试验中第 6 组细胞生长正常。 5）预备试验结果显示，中和剂和中和