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快速诊断 PRRSV 高热变异株和北美株的RT-PCR 检测试 剂盒的研究与应用 第一部分 文献综述 1 猪繁殖与呼吸综合征 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory ，PRRS ），俗称 “蓝 耳病”，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine Reproductive and Respiratory Virus ， PRRSV ）引起猪的一种繁殖障碍和呼吸系统的传染病，具有很强的传染性，不同年 龄、品种和性别的猪均能感染，临床表现为母猪繁殖障碍，呈现流产、死胎、木乃伊 胎及弱仔等症状，仔猪及育成猪主要表现为呼吸系统症状。本病于 1987 年在美国北 卡罗来纳州首次发现，然后迅速向世界各地蔓延，先后在加拿大、日本、德国、荷兰、 西班牙、法国、英国、丹麦等国家发生[1-7] 。1991 年初，我国台湾地区出现此病流行， 于 1996 年分离到了引发该病的病原——猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)，从而证 [8] 实了本病在我国发生与蔓延的流行状况 。1995 年孙颖杰等在我国进口美国的种猪中 检测出 5 头种猪的病毒抗体呈阳性，同年中国农业科学院哈尔滨兽医研究所郭宝清等 首次从国内疑似 PRRS 的猪场中分离到PRRSV ，从而证实了本病在我国大陆地区的 [9] [10] 存在 。简中友等 对采自（1995-1996 年）国内有生殖病史及疑似有 PRRS 猪场的 47 份血清样品进行检测也证实 PRRS 在我国已经存在并正在流行；随后有关本病在国内 猪场频繁发生的报道就一直没有停止。现在本病己在世界各主要养猪国家和地区广泛 存在和流行，已成为现代规模化养殖的主要疫病之一，严重影响养猪业的发展，给养 猪业带来重大的经济损失。 2 猪繁殖与呼吸综合征病毒分子学研究进展 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV ）是一种具囊膜的单股正链RNA 病毒，归属 于动脉炎病毒科、动脉炎病毒属[11] ，与该科其他成员之间在病毒形态、基因组、复制 方式和蛋白组成上相似，但它们之间并无血清学交叉反应。病毒粒子呈球形，直径 45-65nm ，十二面体对称，核衣壳约25-35nm ，上有长约 5nm 突起，外绕一层脂质双 1 层膜，易被脂溶性溶剂如氯仿、乙醚等溶解，在氯化铯密度梯度中浮密度为 3 3[12] 1.13-1.19g/cm ，在蔗糖密度梯度中为 1.18-1.23g/cm 。 病毒无凝血性，不凝集猪、绵羊、山羊、牛、兔、豚鼠、鸡、鸭、鹅和人 O 型红 细胞，但病毒用非离子除垢剂处理后，再用脂溶剂处理，则可凝集小鼠的红细胞。病 毒对多种巨噬细胞具有亲噬性，包括肺泡巨噬细胞（PAM ）、外周血单核细胞、肺血 管内巨噬细胞（PAM ）等．接种后24-72h 可观察到特异的细胞病变，病毒量可达 5 6 10 -10 /ml 。猪脾巨噬细胞、脑小胶质细胞以及传代细胞系MA-104 、Marc-145 、CL-2621 CRL-1117 等均可复制病毒。病毒在巨噬细胞中复制具有抗体依赖性病毒增强作用 (ADE) 。Yoon[13] 的研究证实同一毒株对抗体的中和作用与抗体效价呈负相关，表明抗 体的存在可增强对细胞的感染。 PRRSV 基因组存在高度变异性，通过氨基酸序列比较发现，PRRSV 更接近于小 鼠乳酸脱氢酶病毒（LDV ）。根据病毒基因组的差异，PRRSV 可分为两个血清型：欧 洲型（LV 株为代表株）和美洲型（ATCC-VR-2332 株为代表株）[14] ，病毒的两个血 清型间的氨基酸的同源性为 78-81% ，美国和欧洲分离的病毒毒株，在抗原特异性上 存在差异。我国目前分离的 PRRSV ，应用多价血清和单克隆抗体检测，近似于美洲 株，是否有欧洲型毒株存在尚不清楚。 PRRSV 为不分节段、聚腺苷酸化、有囊膜的单链正股 RNA 病毒，其基因组长约 [15] 为 15kb，含有 9 个开放阅读框架（ORFs ） ，病毒基因组的每