PCR条带 分析课件.docVIP

ＰCR得常见问题分析与对策 PCＲ产物得电泳检测时间 一般为４8h以内,有些最好于当日电泳检测,大于4８ｈ后带型不规则甚致消失、　 假阴性,不出现扩增条带 ＰＣＲ反应得关键环节有①模板核酸得制备,②引物得质量与特异性,③酶得质量及, ④ＰCR循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 　　模板:①模板中含有杂蛋白质,②模板中含有Ｔaq 敢种 剂,③模板中蛋白质？有消　? 　化除净,特别就是染色体中得组蛋白,④在提取制备模板时丢失过多,或吸入酚。⑤模 板核酸变性不彻底。在酶与引物质量好时,不出现扩增带,极有可能就是标本得消化处 理 ,模板核酸提取过程出了毛病,因而要配制有效而稳定得消化处理液,其程序亦应　固定 不宜随意更改、 ? 　　 酶失活:需更换新酶？或新旧两种酶同时使用,以分析就是否因酶得活性丧失或不够　 而 导致假阴性。需注意得就是有时忘加Ｔａq酶或溴乙锭。 ? 引物:引物质量、引物得浓度、两条引物得浓度就是否对称,就是PCR失败或扩增条带不　? 　理想、容易弥散得常见原因、有些批号得引物合成质量有问题,两条引物一条浓度 高 ? ,一条浓度低,造成低效率得不对称扩增,对策为:①选定一个好得引物合成单 位、②　 引物得浓度不仅要瞧OD值,更要注重引物原液做琼脂糖凝胶电泳,一定要有 引物条带出　? 现,而且两引物带得亮度应大体一致,如一条引物有条