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DkMATE1 和miR858 参与柿果实原花青素代谢研究 目录 摘要 i Abstractiii 缩略词表（Abbreviation ） v 第一章 前言 1 1. 课题的提出 1 2. 柿原花青素代谢调控机制 2 2.1 柿原花青素的种类 2 2.2 柿原花青素的组成和结构 3 2.3 柿原花青素生物合成 5 2.4 柿果实脱涩机理 7 3. miRNA 研究进展 8 3.1 miRNA 的发现 8 3.2 miRNA 的生物合成和作用机制 8 3.3 园艺植物miRNA 的生物学功能 9 4. 本研究的目的意义 12 第二章 柿原花青素前体跨膜转运基因DkMATE1 的克隆及功能验证 14 1. 前言 14 2. 材料和方法 16 2.1 材料 16 2.2 方法 17 3. 结果 21 3.1 果实发育过程中外观形态和脱涩状态的变化 21 3.2 果实发育过程中单宁细胞大小的变化 23 3.3 不同柿品种果实发育过程中原花青素含量的变化 25 3.4 DkMATE1 在不同脱涩类型果实中的表达模式 26 3.5 DkMATE1 在不同组织中的表达模式 27 3.6 DkMATE 1 的序列同源性与结构域 27 3.7 DkMATE1 的亚细胞定位 30 3.8 DkMATE1 在活体叶片中瞬时超表达 30 3.9 DkMATE 1 在活体叶片中瞬时干涉表达 31 4. 讨论 32 5. 小结 34 第三章 中国甜柿原花青素合成相关miRNA 的筛选及功能验证 35 1. 前言 35 2. 材料和方法 37 2.1 材料 37 2.2 方法 38 3. 结果 43 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位（毕业）论文 3.1 中国甜柿果实发育过程中原花青素含量的变化特点 43 3.2 与中国甜柿原花青素代谢相关的miRNA 种类 43 3.3 与中国甜柿原花青素代谢相关的miRNA 的候选靶基因 46 3.4 miR858b 和DkMYB19 及DkMYB20 在 ‘鄂柿1 号’果实不同发育 时期的表达模式差异 47 3.5 DkMYB19 和DkMYB20 的序列比对和聚类 48 3.6 miR858b 靶基因的验证 51 3.7 DkMYB19 ，DkMYB20 的亚细胞定位 51 3.8 柿活体叶片和果实圆片中瞬时表达 53 3.9 拟南芥遗传转化和柿组培苗叶片遗传转化 56 3.10 DkMYB 19 与DkPK2 互作 57 4. 讨论 59 5. 小结 63 第四章 农杆菌介导的 ‘恭城水柿’稳定遗传转化 64 1. 前言 64 2. 材料和方法 65 2.1 材料 65 2.2 方法 65 3. 结果 68