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油菜及其近缘种不同组织花青素累积的分子机制研究 目 录 摘 要 i Abstract iv 缩略语表viii 1 文献综述 1 1.1 我国油菜产业发展现状 1 1.2 外源渗入系在甘蓝型油菜中的研究与利用 2 1.2.1 芸薹属及近缘种质资源 2 1.2.2 远缘杂交和外源渗入 2 1.2.3 外源渗入系的研究与利用 3 1.3 花青素的生物合成及利用 4 1.3.1 花青素基本结构及种类 4 1.3.2 花青素的合成及修饰 6 1.3.3 花青素生物合成的转录调控 6 1.3.4 芸薹属花青素代谢相关基因研究进展 11 1.3.5 芸薹属近缘种花色变异研究进展 13 1.3.6 花青素的利用价值 14 1.4 植物可变剪接现象及其功能研究进展 15 1.5 本研究的目的与意义 16 2 甘蓝型油菜外源渗入系紫色植株性状的遗传分析 18 2.1 材料与方法 18 2.1.1 实验材料与生长环境 18 2.1.2 实验载体和菌株 18 2.1.3 主要试剂和使用的仪器 18 2.1.4 PR 亲本纯化及表型考察 19 2.1.5 植物组织DNA 的提取 19 2.1.6 植物组织RNA 提取及cDNA 的合成 19 2.1.7 目的基因确定 20 2.1.8 BnaPAP2.A7 特异引物的设计及qRT-PCR 验证 20 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位（毕业）论文 2.1.9 不同品系甘蓝型油菜BnaPAP2.A7 序列分析21 2.1.10 BnaPAP2.A7 三个转录本的亚细胞定位21 2.1.11 BnaPAP2.A7 三个转录本酵母双杂实验22 2.1.12 BnaPAP2.A7 及其三个转录本阳性株系表达分析23 2.1.13 BnaPAP2.A7 及其三个转录本阳性株系花青素代谢分析23 2.1.14 BnaPAP2.A7 及其二个转录本阳性株系转录组及qRT-PCR 分析24 2.1.15 紫秆性状基因定位群体构建24 2.1.16 F2 分离群体极端单株选取及BSA 测序24 2.1.17 InDel 标记的开发和群体DNA 提取25 2.1.18 交换单株的筛选与确定25 2.1.19 候选基因的预测及比较测序25 2.1.20 紫叶油菜不同组织部位表达模式分析和qRT-PCR 验证26 2.1.21 同源基因共线性分析26 2.2 结果与分析26 2.2.1 甘蓝型油菜外源渗入系PR 表型26 2.2.2 BnaPAP2.A7 等位基因的表达差异及原因分析27 BnaPAP2.A7 三种转录本的表达丰度分析29 BnaPAP2.A7 三种转录本编码蛋白的亚细胞定位31 BnaPAP2.A7 三种转录本编码蛋白保守结构域与酵母双杂分析31 BnaPAP2.A7 及其二个转录本转基因阳性株系表达分析35 BnaPAP2.A7 及其二个转录本转基因阳性株系花青素代谢分析37 BnaPAP2.A7 及其二个转录本转基因阳性株系叶片转录组分析39 qRT-PCR 验证转基因阳性株系叶片转录组结果42 2.2.3 PR 紫秆性状的遗传分析44 PR 纯化45 紫秆性状的遗传分析45 BnaPS.C6 的初步定位46 Bna