生物科技行业环境微生物实验指导内容生命科学学院本科基础实验教学中心.pdfVIP

生物科技行业环境微生物实验指 导内容生命科学学院本科基础实 验教学中心 第一部分 基础实验 实验一 显微镜的基本构造、使用和保养 一、目的要求 1.熟悉普通光学显微镜的构造及各部分的功能。 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。 二、显微镜的基本构 显微镜是由机械装置和光学系统两大部分组成。 1 ．机械装置 镜座(base)和镜臂(arm)镜座位于显微镜底部,呈马蹄形，它支持全镜。镜臂有固定式和 活动式两种，活动式的镜臂可改变角度。镜臂支持镜筒。 镜筒(body tube)是由金属制成的圆筒，上接目镜，下接转换器。镜筒有单筒和双筒两 种，单筒又可分为直立式和后倾式两种。而双筒则都是倾斜式的，倾斜式镜筒倾斜 45° 。双 筒中的一个目镜有屈光度调节装置，以备在两眼视力不同的情况下调节使用。 转换器(nosepiece)为两个金属碟所合成的一个转盘，其上装 3—4 个物镜,可使每个物 镜通过镜筒与目镜构成一个放大系统。 载物台(stage)又称镜台，为方形或圆形的盘，用以载放被检物体，中心有一个通光孔。 在载物台上有的装有两个金属压夹称标本夹，用以固定标本；有的装有标本推动器，将标本 固定后，能向前后左右推动。有的推动器上还有刻度，能确定标本的位置，便于找到变换的 视野。 调焦装置 是调节物镜和标本间距离的机件，有粗动螺旋（coarse adjustment）即粗 调节器和微动螺旋（fine adjustment）即细调节器，利用它们使镜筒或镜台上下移动，当 物体在物镜和目镜焦点上时，则得到清晰的图像。 2 ．光学系统 物镜（objective）物镜安装在镜筒下端的转换器上，因接近被观察的物体，故又称接 物镜。其作用是将物体作第一次放大，是决定成像质量和分辨能力的重要部件。物镜上通常 标有数值孔径、放大倍数、镜筒长度、焦距等主要参数。如：NA 0.30 ；10× ；160/0.17 ；16㎜。 其中“NA 0.30”表示数值孔径（numerical　aperture,简写为NA ），“10×”表示放大倍数， “160/0.17”分别表示镜筒长度和所需盖玻片厚度（㎜），“16㎜”表示焦距。 目镜（coular lens）装于镜筒上端，由两块透镜组成。目镜把物镜造成的像再次放大， 不增加分辨力，上面一般标有 7× 、10× 、15×等放大倍数，可根据需要选用。一般可按与物 镜放大倍数的乘积为物镜数值孔径的 500—700 倍，最大也不能超过 1000 倍的选择。目镜的 放大倍数过大，反而影响观察效果。 聚光器（condenser）光源射出的光线通过聚光器汇聚成光锥照射标本，增强明度和 成适宜的光锥角度，提高物镜的分辨力。聚光器由聚光镜和虹彩光圈（iris diaphragm）组 成，聚光镜由透镜组成。虹彩光圈由簿金属片组成，中心形成圆孔，推动把手可随意调整透 进光的强弱。调节聚光镜的高度和虹彩光圈的大小，可得到适当的光照和清晰的图像。 光源（light source）较新式的显微镜其光源通常是安装在显微镜的镜座内，通过按扭 开关来控制；老式的显微镜大多是采用附着在镜臂上的反光镜，反光镜是一个两面镜子，一 面是平面，另一面是凹面。在使用低倍和高倍镜观察时，用平面反光镜；使用油镜或光线弱 时可用凹面反光镜。 滤光片（filter）可见光是各种颜色的光组成的，不同颜色的光线波长不同。如只需某 一波长的光线时，就要用滤光片。选用适当的滤光片，可以提高分辨力，增加影像的反差和 清晰度。滤光片有紫、青、蓝、绿、黄、橙、红等各种颜色的，分别透过不同波长的可见光， 可根据标本本身的颜色，在聚光器下加相应的滤光片。 三、器材 显微镜、擦镜纸、香柏油、二甲苯、染色玻片标本 四、显微镜的使用 (1)安放显微镜　打开镜箱，右手紧握镜臂，左手平托镜座，轻放桌上，距离桌子边缘 几厘米处，使目镜对着观察者。 （2）检查　检查各部件是否完好，镜身、镜头必须清洁。 （3）对光　配置内置式电光源的显微镜可直接打开电源开关，并调节光量，使视野内 的亮度达到明暗适宜，同时打开光圈。旧式显微镜应首先将虹彩光圈的孔径调至最大，将聚 光器升至最高点，再将低倍镜对准镜台孔，镜头离载物台约 1㎝。这时，把反光镜转向光源， 直到视野中的光线既明亮又均匀时为止。在镜检全过程中，根据所需光线的强弱，还