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利用植物介导的RNAi 技术创造棉花抗盲蝽新种质 目 录 目录I 摘要V Abstract VII 缩略词表X 第一章 文献综述 1 1.1 棉花抗虫育种研究进展 1 1.1.1 形态抗虫育种2 1.1.2 生化抗虫育种4 1.1.3 分子标记辅助选择抗虫育种4 1.1.4 转外源抗虫基因抗虫育种4 1.1.5 利用RNAi 技术沉默昆虫靶标基因抗虫育种9 1.2 盲蝽的危害特点及抗盲蝽研究的必要性 11 1.2.1 盲蝽的种类及形态特征 11 1.2.2 盲蝽的生活习性以及危害特点 11 1.2.3 开展棉花抗盲蝽研究的重要性和必要性 13 1.3 RNAi 的研究进展及在作物抗虫育种中的应用 16 1.3.1 RNAi 现象的发现及定义 16 1.3.2 RNAi 的作用机理及特点 17 1.3.3 RNAi 的种类 19 1.3.4 昆虫摄取dsRNA 的方式 19 1.3.5 植物介导的RNAi 技术在作物抗虫育种中的应用22 1.4 FAR 基因研究进展30 1.5 LIM 基因研究进展32 1.6 本研究的目的意义与技术路线34 1.6.1 本研究的目的与意义34 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位（毕业）论文 1.6.2 本研究的技术路线37 第二章 实验材料与方法38 2.1 实验材料38 2.1.1 植物材料，载体和菌株38 2.1.2 植物表达载体38 2.1.3 基因的来源38 2.1.4 供试的昆虫材料38 2.1.5 主要试剂39 2.2 实验方法39 2.2.1 载体构建39 2.2.2 棉花遗传转化40 2.2.3 棉花DNA 提取与Southern 杂交40 2.2.4 棉花RNA 提取，表达量分析以及Northern 杂交40 2.2.5 盲蝽RNA 提取，反转录以及RT-qPCR 基因表达量分析41 2.2.6 盲蝽的田间抗虫鉴定42 2.2.7 转基因棉花大田农艺性状评价43 2.2.8 非靶标昆虫的室内抗性鉴定43 2.2.9 绿盲蝽的室内抗性鉴定44 2.2.10 dsAlLIM 和dsGFP 处理后绿盲蝽的转录组分析44 第三章 利用植物介导的RNAi 技术创造棉花抗中黑盲蝽新种质45 3.1 结果与分析45 3.1.1 AsFAR 转基因棉花的获得与分子检测45 3.1.2 AsFAR 转基因棉花的表达量检测47 3.1.3 AsFAR 转基因棉花对中黑盲蝽种群数量的影响48 3.1.4 AsFAR 转基因棉花对中黑盲蝽内源靶标基因表达水平的影响50 3.1.5 AsFAR 转基因棉花对中黑盲蝽的抗性显著增强51 3.1.6 AsFAR 转基因棉花对非靶标害虫的影响54 3.1.7 不同世代AsFAR 转基因棉花大田农艺性状及纤维品质调查分析55 II 利用植物介导的RNAi 技术创造棉花抗盲蝽新种质 3.2 讨论56 第四章 利用植物介导的RNAi 技术创造棉花抗绿盲蝽新种质59 4.1 结果与分析59 4.1.1 基因序列分析及载体构建59 4.1.2 AlLIM 转基因棉花的获得60 4.1.3 AlLIM 转基因棉花的阳性检测及拷贝数分析61 4.1.4 AlLIM 转基因棉花的表达量检测62 4.1.5 AlLIM 转基因棉花对绿盲蝽内源靶标基因表达水平的影响64 4.1.6 AlLIM 转基因棉花的室内饲喂效果