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两个玉米产量性状基因ZmSMK9 和ZmSRL5 的克隆及功能分析 目 录 摘 要 i Abstract iv 缩略词表 viii 第一部分 调控玉米籽粒发育基因ZmSMK9 的克隆及功能分析1 1 前言1 1.1 玉米籽粒结构1 1.2 玉米籽粒发育2 1.3 玉米籽粒的遗传解析5 1.3.1 玉米籽粒相关性状的QTL 研究进展5 1.3.2 玉米籽粒发育相关基因克隆和调控机制研究进展6 1.4 玉米线粒体基因组及其表达 11 1.4.1 玉米线粒体基因组11 1.4.2 线粒体基因的表达13 1.5 PPR 蛋白功能研究进展17 1.5.1 PPR 蛋白分布与分类17 1.5.2 PPR 蛋白的生物学功能19 1.5.3 PPR 蛋白与植物的生长发育20 1.6 研究目的与意义20 2 材料和方法21 2.1 试验材料21 2.1.1 植物材料21 2.1.2 菌株和载体21 2.2 试验方法22 2.2.1 石蜡切片22 2.2.2 扫描电镜观察22 2.2.3 透射电镜观察22 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位 （毕业）论文 2.2.4 籽粒淀粉和蛋白成分测定 23 2.2.5 农艺性状考察 23 2.2.6 ZmSMK9 基因定位 23 2.2.7 候选基因序列分析 24 2.2.8 RNA 提取及qRT-PCR 24 2.2.9 亚细胞定位 24 2.2.10 线粒体复合体的分离 25 2.2.11 线粒体电子传递链复合体Ⅰ的活性分析 25 2.2.12 转录组测序分析 26 3 结果与分析 26 3.1 smk9 表型鉴定与遗传分析 26 3.1.1 杂合基因型植株自交果穗不同发育阶段果穗及籽粒表型调查分 析 26 3.1.2 成熟籽粒蛋白和淀粉含量测定 27 3.1.3 授粉后不同发育时期野生型与突变体籽粒胚和胚乳差异分析.. 28 3.1.4 smk9 基因型纯合后代农艺性状考察 31 3.2 ZmSMK9 定位、克隆及进化分析 33 3.2.1 ZmSMK9 初定位与克隆 33 3.2.2 ZmSMK9 进化分析 34 3.3 ZmSMK9 功能分析及调控籽粒发育机制 36 3.3.1 ZmSMK9 功能验证 36 3.3.2 ZmSMK9 表达分析 37 3.3.3 ZmSMK9 突变影响线粒体基因nad5 第 1 和第4 内含子的剪接效 率 38 3.3.4 线粒体结构和功能分析 40