橘小实蝇CRISPR_Cas9基因编辑技术及Y特异性基因spermless功能研究.pdfVIP

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2021-01-09 发布于江苏
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橘小实蝇CRISPR_Cas9基因编辑技术及Y特异性基因spermless功能研究.pdf

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橘小实蝇CRISPR/Cas9基因编辑技术及Y 特异性基因spermless 功能研究目录目录I 摘要i Abstractiv 第一章文献综述1 1.1 基因编辑的发展历史1 1.1.1ZFNs1 1.1.2 TALENs3 1.1.3CRISPR/Cas94 1.2 CRISPR/Cas9技术在昆虫中的研究应用5 1.2.1 在基因功能研究中的应用5 1.2.2 在害虫防治中的应用6 1.2.3 在昆虫改良中的应用7 1.3Y 染色体的研究进展7 1.3.1Y 染色体的起源与进化7 1.3.2Y 染色体基因功能研究8 1.4 本研究内容及其目的意义10 1.5 技术路线11 第二章基于CRISPR/Cas9 系统的橘小实蝇mew 基因功能研究12 2.1 材料与方法12 2.1.1 实验材料12 2.1.2 实验方法16 2.1.3 数据统计方法28 2.2 结果与分析29 2.2.1mew 基因的克隆与分析29 2.2.2 橘小实蝇mew 基因的敲除34 2.2.3mew 突变表型基因型及检测36 2.3 讨论42 第三章橘小实蝇CRISPR/Cas9基因编辑技术的优化44 I 华中农业大学2019届博士研究生学位（毕业）论文 3.1 材料与方法44 3.1.1 实验材料44 3.1.2 实验方法45 3.1.3 数据统计分析51 3.2 结果与分析51 3.2.1all-in-one质粒构建51 3.2.2 基于tra基因敲除验证质粒57 3.2.3 四种Cas9/sgRNA 导入方法比较61 3.3 讨论62 Y 65 第四章基于单胚胎测序的雄性偏向性以及特异性基因筛选 4.1 方法与材料66 4.1.1 实验材料66 4.1.2 实验方法66 4.1.3 数据统计方法72 4.2 结果与分析74 4.2.1 取样建库测序74 4.2.2 基于有参分析筛选雄性偏向性基因78 4.2.3 Y 92 基于无参分析筛选特异性基因 4.3 讨论95 第五章 Y 特异性基因spermless 功能研究97 5.1方法与材料97 5.1.1 实验材料97 5.1.2 实验方法98 5.1.3 数据统计方法101 5.2 结果与分析102 5.2.1 基因克隆及序列分析102 5.2.2spermless 基因的功能研究105 5.3 讨论111 第六章结论与展望114 6.1 结论114 II 橘小实蝇CRISPR/Cas9基因编辑技术及Y 特异性基因spermless 功能研究 6.2 研究创新点115 6.3 展望116 参考文献117 攻读博士期间主要成果132 致谢133 III 橘小实蝇C