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不同形式的蛋氨酸源在猪不同细胞系中的代谢特征和对细胞功能的影响 目 录 摘 要 i ABSTRACT v 缩略语表 x 第一章 文献综述 1 1 前言 1 2 Met 的代谢 2 3 Met 及其代谢产物影响机体甲基化状态 3 3.1 DNA 甲基化修饰 4 3.2 RNA 甲基化修饰 6 3.3 组蛋白甲基化修饰 7 4 猪日粮Met 来源及其研究进展 8 4.1 Met 添加剂的现状与理化性质 8 4.2 Met 源转化为L-Met 的酶促反应 9 4.3 在不同组织中的代谢 10 4.3.1 肠道 10 4.3.2 肝脏 11 4.3.3 肾脏 12 4.3.4 胎盘 12 4.4 对猪不同组织功能的影响 14 4.4.1 肠道屏障功能 14 4.4.2 肝脏抗氧化防御功能 14 4.4.3 胎盘营养物质转运功能 15 5 LC-MS/MS 在Met 代谢产物检测中的应用 17 5.1 Met 的检测方法 17 5.2 LC-MS/MS 检测Met 代谢产物 17 6 研究的目的与意义 19 第二章 同时检测Met 代谢产物与辅助因子的LC-MS/MS 方法的建立 19 I 华中农业大学2020 届博士研究生学位（毕业）论文 1 前言 19 2 材料与方法 20 2.1 主要实验仪器 20 2.2 主要试剂与配制 20 2.3 细胞培养 21 2.3.1 IPEC-J2 细胞培养 21 2.3.2 PIEC 细胞培养 21 2.4 样品前处理 21 2.5 液相色谱条件 22 2.6 质谱条件 22 2.7 方法验证 23 2.7.1 检出限与定量限 23 2.7.2 线性与基质效应 23 2.7.3 提取回收率 23 2.7.4 准确度与精密度 24 2.8 数据处理和统计 24 3 结果与分析 24 3.1 液相色谱条件的优化 24 3.2 前处理条件优化 28 3.3 方法性能评价 29 3.4 实际样品检测 34 4 讨论 37 第三章 Met 源在猪不同细胞系中的代谢特点 39 1 前言 39 2 材料与方法 40 2.1 主要仪器 40 2.2 主要试剂与配制 40 2.2.1 主要试剂 40 2.2.2 主要试剂配制 41 2.3 细胞培养 42 II 不同形式的蛋氨酸源在猪不同细胞系中的代谢特征和对细胞功能的影响 2.3.1 IPEC-J2 细胞培养 42 2.3.2 猪原代肝脏细胞分离与培养 42 2.3.3 PK-15 细胞培养 42 2.3.4 PIEC 细胞培养 42 2.3.5 pTr2 细胞培养 43 2.4