生物科技行业生物堆肥现状及其发展前景.pdfVIP

生物科技行业生物堆肥现状及其 发展前景 生物堆肥的现状与发展前景 丁宇 摘要 ：综述了有机固体废弃物堆肥微生物学的研究方法的最新进展，以及堆肥过程中微生物 的研究现状，提出了堆肥微生物学研究存在的主要问题和发展趋势。 关键词 ：堆肥；微生物学；微生物；有机固体废弃物 人类为满足自身活动的需要，在生产和生活过程中会产生大量的有机固体废弃物。这些 有机固体废弃物主要包括农作物秸秆、畜禽粪便、城市生活垃圾以及污水处理厂污泥。随着 其产量的不断增长，有机固体废物的累积和对环境污染的日趋严重，其处理处置已成为人类 面的重要问题之一。 堆肥作为一种保持良好环境效应的产物，具有生物处理的可持续性和废弃资源的循环利 用等特征，已被许多国家和地区所接受，成为处理有机固体废物的有效方法之一。堆肥化的 实质是微生物在适宜条件下的代谢作用。国内外学者对堆肥微生物学进行了广泛研究。微生 物在堆肥过程中扮演着重要角色，不仅与堆肥周期、堆肥质量密切相关，还与臭味控制、氮 损失紧密相关。因此，堆肥微生物学研究对开发堆肥微生物资源，加速堆肥过程，缩短堆 肥周期，提高堆肥质量，减少堆肥过程中的氮损失、 臭气挥发和产生具有重要意义。 1 堆肥微生物学研究方法 分离、培养和生理生化鉴定是堆肥微生物学的传统研究方法。然而，微生物种类繁多， 自然界中仅有极少数微生物得到鉴定， “存活而能培养”的种类至多为 1％。近年来，随着 研究手段的改善和研究方法的创新，一些新研究新方法应运而生，为堆肥微生物学的研究提 供了新的途径。 l ，1 分离培养方法 传统培养分离方法是最早的认识微生物群落结构和多样性的方法，也是微生物学研究的 经典方法，自 1880 年发明以来一直到现在仍被广泛使用。传统培养分离方法是将定量样品 接种于培养基中，在一定的温度下培养一定的时问，然后对生长的菌落计数和计算含量，并 通过在显微镜下观察其形态构造，结台培养分离过程生理生化特性的观察鉴定种属分类特性。 冯明谦等研究了滚筒式高温堆肥过程中微生物种类和数量，分离鉴定了细菌 5 属 20 株、霉菌 8 属 13 株、放线菌 1 属 3 株、酵母菌 2 属 2 株。同时，结果表明，细菌和霉菌是 堆肥过程中的优势类群，芽孢杆菌和曲霉菌是优势种。 分离、培养的方法采用·定配比的培养基和固定的培养温度，忽略了气候变化和生物相 互作用的影响，具有明显的人工选择性。由于分离、培养法具有选择性，这种人工环境与原 生境的偏差使得可培养的种类大大减少，很有可能遗漏一些有意义的微生物。同时，也制约 了人们对堆肥微生物学机理的深入了解。 1 ．2 分子生物学方法 分子生物学技术是通过检测样晶中微生物特定的DNA 或RNA 片段来判断某种微生物的存 在与否。自从 Muyzer 等首次报道了 16SrDNA 应用，该技术现已成为环境样品微生物多样性 研究的重要工具。利用 16s rDNA 进行微生物多样性研究具有有效、准确和偏好小等优点， 引起了学者们的关注。 随着提取和纯化环境微生物总DNA 的方法的改善和发展，保证了列提取的环境样品总 DNA 进行扩增。Von Wintzingemde 等通过直接从样品中提取 DNA 进行分析发现，浚方法不仅 DNA 产量高，而且节约时间，比分离培养造成的偏好小得多。LaMontagne 等证实了上述结果 的可靠性。Howeler 等对堆肥样品微生物 DNA 提取、纯化方法及其质量进行了定量分析，定 量研究腐殖质污染对电泳和 PcR 扩增的影响及其消除方法，为堆肥样品 DNA 的 提取和纯化提供了基本思路，也为后续研究奠定了技术基础。 1 ．2 ．1 PcR 与 DNA 指纹技术 聚合酶链反应(PcR)是一项能把靶 DNA 量扩增百万倍或更多的技术，它彻底改革了分子生物 学的方法学。PcR 在 1985 年首次被发现，现在已成为包括与环境微生物学相关的重要实验 方法。可以扩增环境中少量的DNA 这一能力使检出非常灵敏。环境微生物 DNA 提取物中是不 同微生物DNA 的混合物，经PcR 扩增后，其产物是等长但不同源 DNA 片断的混合物。混合物 中序列的多样性和不同序列的丰度在一定程度上反映了原始样品中微生物种群的多样性和 不同物种的丰度。经过大量研究，现已有多种 DNA 指纹技术，如末端片断长度多态性分析 (T—RFLP) 、变性梯度凝胶电泳(DGGE)等。 Tiquia 等采用T—R