DkMYB15在中国甜柿原花青素生物合成中的功能研究.pdf

DkMYB15 在中国甜柿原花青素生物合成中的功能研究  目 录 摘要 i Abstract ii 缩略词表 iv 1 前言 1 1.1 课题的提出 1 1.2 前人研究进展 2 1.2.1 柿原花青素研究进展 2 1.2.2 MYB 转录因子与原花青素的合成 7 1.3 研究目的和内容 11 2 材料与方法 12 2.1 试验材料 12 2.2 试验方法 12 2.2.1 柿果单宁含量测定 12 2.2.2 总 RNA 提取及 cDNA 合成 13 2.2.3 实时定量 PCR 14 2.2.4 DkMYB15 系统进化分析 15 2.2.5 超表达载体构建 15 2.2.6 柿果实瞬时遗传转化 19 2.2.7 柿活体叶片瞬时遗传转化 20 2.2.8 DkMYB15-GFP121 亚细胞定位载体构建 20 2.2.9 酵母单杂交 22 2.2.10 酵母双杂交 26 2.2.11 双分子荧光互补 27 3 结果与分析 28 3.1 DkMYB15 转录因子的序列分析 28 3.2 DkMYB15 在不同脱涩类型柿品种中的表达模式 29 3.3 DkMYB15 的亚细胞定位 30 3.4 瞬时超表达DkMYB15 对柿果实圆片相关基因表达的影响 30 I 华中农业大学 2020 届硕士研究生学位论文 3.5 瞬时超表达DkMYB15 对柿果实圆片单宁含量的影响 31 3.6 DkMYB15 与 DkbHLH2 互作验证 32 3.6.1 DkbHLH2 转录因子表达模式及序列分析 32 3.6.2 DkMYB15 与 DkbHLH2 酵母双杂交验证 33 3.6.3 DkMYB15 与 DkbHLH2 双分子荧光互补验证 34 3.7 共表达 DkMYB15 与 DkbHLH2 对柿叶片相关基因表达的影响 35 3.8 共表达 DkMYB15 与 DkbHLH2 对柿叶片单宁含量的影响 35 3.9 DkMYB15 与DkANR 的启动子互作验证 36 4 讨论 38 4.1 DkMYB15 抑制可溶性单宁的生物合成 38 4.2 DkMYB15 特异抑制单宁生物合成关键基因的表达 39 4.3 DkMYB15 与 bHLH 转录因子相互作用 39 5 进一步研究设想 40 参考文献 41 附录 50 简历及在学期间科研实践 56 致谢 57               II DkMYB15 在中国甜柿原花青素生物合成中的功能研究  摘要  柿单宁属缩合单宁 （又称“原花青素”）是柿果中大量积累的次生代谢产物， 也是其产生涩感的主要原因。已知柿原花青素生物合成涉及多个结构基因参与并 受转录因