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大麦籽粒代谢性状的mQTL 分析及候选基因的功能验证 目 录 摘 要i Abstractiii 缩略词表vi 1 前言1 1.1 代谢物与代谢组学1 1.1.1 植物代谢组学的研究内容2 1.1.2 代谢组学的发展2 1.1.3 植物代谢组学分析技术研究进展3 1.2 代谢组学在麦类作物中的应用6 1.3 代谢数量性状7 1.4 多组学相结合分析方法的发展及应用9 1.5 植物类黄酮物质的研究进展12 1.5.1 植物类黄酮物质的结构与分类12 1.5.2 植物类黄酮物质的功能12 1.5.3 类黄酮生物合成途径13 1.5.4 类黄酮生物合成的关键酶基因14 1.6 研究目的与意义17 2 材料方法18 2.1 DH 18 大麦 群体材料和取样 2.1.1 DH 18 大麦 群体材料与种植 2.1.2 亲本灌浆时期籽粒取样18 2.1.3DH 群体成熟籽粒取样19 2.2 样品的准备与提取19 2.2.1 代谢样品的准备与代谢物提取19 2.2.2 双亲叶片DNA 的提取 19 2.2.3 双亲灌浆期籽粒RNA 的提取20 2.2.4 双亲灌浆期籽粒cDNA 的合成20 2.3 代谢样品检测及数据处理20 2.4 统计分析21 2.5mQTL 分析21 2.6 候选基因的克隆22 I 华中农业大学2019 届硕士研究生学位论文 2.7 候选基因的原核表达24 2.8 候选基因蛋白的体外酶活实验24 2.9 候选基因的表达量分析24 2.10 生物信息学分析25 3 结果分析26 3.1 大麦成熟籽粒代谢相关基因的mQTL 分析26 3.1.1 大麦成熟籽粒的代谢性状的分布26 3.1.2 大麦成熟籽粒代谢相关基因的mQTL 定位29 3.2mQTL 的分布32 3.3 大麦DH 群体候选基因的筛选34 3.4 候选基因的克隆与序列分析38 3.4.1 候选基因的克隆38 3.4.2 候选基因序列分析38 3.5 候选基因的生物信息学分析41 3.5.1 候选基因蛋白的基本理化性质分析41 3.5.2 候选基因蛋白的跨膜结构域预测43 3.5.3 蛋白结构预测43 3.5.4 候选基因蛋白的三级结构的同源建模44 3.6 候选基因的原核表达46 3.7 候选基因编码蛋白的功能验证47 3.7.1 糖基转移酶基因的功能验证48 3.7.2 脱羧酶基因的功能验证51 3.7.3 酰基转移酶基因的功能验证53 4 讨论55 4.1 基因差异表达的原因55 4.2 代谢物的积累模式和相关基因的表达模式56 4.3 候选基因的同源分析58 4.4 候选基因的功能及应用60 参考文献62 附 录80 致 谢116