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纳米银调控斑马鱼胚胎神经系统发育及代谢的研究 目 录 摘 要 i Abstract iii 缩略语表vi 第一章 前言 1 1 研究问题的由来 1 2 纳米银的生物学效应 1 3 斑马鱼神经系统发育及代谢途径过程 2 3.1 运动调节神经回路 2 3.2 晶状体的发育 3 3.3 糖酵解代谢途径 4 4 模式生物斑马鱼简介 5 5 研究目的及意义 6 第二章 纳米银破坏斑马鱼胚胎的神经回路进而诱导异常的触碰响应 7 1 引言 7 2 材料和方法 7 2.1 实验材料 7 2.1.1 实验对象 7 2.1.2 所用载体和菌株 7 2.1.3 主要试剂及耗材 8 2.1.4 主要仪器设备 9 2.2 实验方法 10 2.2.1 纳米银溶液、上清溶液、银离子溶液的制备 10 2.2.2 斑马鱼胚胎胁迫处理和注射处理 10 2.2.3 触碰响应分析 11 2.2.4 电生理检测 11 2.2.5 斑马鱼胚胎RNA 的提取 12 2.2.6 总cDNA 的合成 12 2.2.7 实时荧光定量PCR 13 I 华中农业大学2019 届硕士研究生学位（毕业）论文 2.2.8 反义mRNA 探针的合成14 2.2.9 斑马鱼胚胎整体原位杂交15 2.2.10 基因芯片（Microarray ）分析表达谱16 2.2.11 统计学分析16 3 研究结果17 3.1 纳米银胁迫处理的斑马鱼胚胎发生延迟的触碰响应17 3.2 纳米银胁迫的胚胎中神经元膜电位变化18 3.3 Microarray 分析揭示了纳米银胁迫的胚胎中神经发生相关基因的下调表 达18 3.4 运动神经元基因isl1 和isl2a 在纳米银胁迫的胚胎中动态表达20 3.5 纳米银胁迫的胚胎中多巴胺能神经元标记物基因gad1b 和gad2 显著下 调22 3.6 其他神经相关基因在纳米银胁迫的胚胎中动态表达23 3.7 纳米银胁迫对胚胎神经祖细胞基因表达的影响25 3.8 L-半胱氨酸恢复纳米银胁迫的胚胎中神经发生相关基因的表达26 4 讨论27 4.1 纳米银损伤胚胎的触碰响应和神经元电兴奋性27 4.2 纳米银主要通过破坏神经回路诱导功能失调的运动行为28 4.3 纳米银主要通过释放的离子诱导胁迫胚胎的神经回路的缺陷31 5 小结31 第三章 纳米银影响斑马鱼晶状体而不是视网膜的发育33 1 引言33 2 材料与方法33 2.1 实验材料33 2.2 实验方法33 2.2.1 纳米银溶液、上清溶液、银离子溶液的制备33 2.2.2 斑马鱼胚胎胁迫处理和注射处理33 2.2.3 晶状体表型的观察33