Toll样受体9在日本乙型脑炎病毒感染过程中诱导髓源抑制性细胞的作用.pdfVIP

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2021-01-10 发布于江苏
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Toll样受体9在日本乙型脑炎病毒感染过程中诱导髓源抑制性细胞的作用.pdf

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Toll样受体9在日本乙型脑炎病毒感染过程中诱导髓源抑制性细胞的作用目录摘要i Abstractii Abbreviation iv 缩略语表（） 1. 文献综述1 1.1 日本乙型脑炎1 1.2 日本乙型脑炎病毒的病原学特点2 1.3 日本乙型脑炎病毒感染的免疫应答3 1.3.1 体液免疫应答4 1.3.2 细胞免疫应答4 1.4 MDSCs 5 髓源抑制性细胞（） 1.4.1MDSCs 的扩增与激活6 1.4.2MDSCs在感染中的作用7 1.4.3TLR MDSCs 9 在生成中的作用 2. 目的与意义11 3. 材料与方法12 3.1 实验材料12 3.1.1 实验动物、细胞、毒株12 3.1.2 主要药品和试剂12 3.1.3 试剂的配置13 3.1.4 仪器设备15 3.1.5 实验手术器械15 3.2 实验方法16 3.2.1BHK 细胞的复苏与培养16 3.2.2JEV-P3株的扩增与毒价测定16 3.2.3 体外诱导骨髓来源的树突状细胞培养17 3.2.4JEV-P3体外感染骨髓细胞18 3.2.5JEV-P3感染C57BL/6 小鼠19 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位论文 3.2.6 脾脏单细胞悬液的制备19 3.2.7 淋巴结单细胞悬液的制备20 3.2.8 细胞表面染色和胞内染色20 3.2.9RNA 的提取21 3.2.10 反转录PCR22 3.2.11 荧光定量PCR23 3.2.12Western Blot24 3.2.13 体外细胞共培养实验25 3.2.14 空斑中和实验25 3.2.15 细胞DNA 以及胞浆DNA 的提取26 3.2.16 线粒体膜电位检测27 3.2.17 实验动物伦理申明28 3.2.18 手术器械消毒和实验动物及废物无害化处理28 3.2.19 流式细胞数据分析28 3.2.20 数据分析28 4. 结果与分析29 4.1JEV 感染诱导M-MDSCs29 4.1.1JEV 感染抑制树突状细胞的分化29 4.1.2JEV 感染体内诱导M-MDSCs30 4.1.3JEV 感染体外诱导M-MDSCs31 4.2TLR9参与体外JEV 感染诱导M-MDSCs34 4.2.1 PRRs JEV 34 相关在感染骨髓细胞中的变化 4.2.2TLR3 JEV M-MDSCs 34 对诱导的影响 4.2.3TLR9 JEV M-MDSCs 36 对诱导的影响 4.3 JEV M-MDSCs TLR9 39 参与感染诱导的下游信号 4.3.1TLR9-STAT1参与JEV 诱导M-MDSCs39 4.3.2 CCND1 GATA2 TLR9/STAT1 42 、参与信号通路 4.4JEV 感染诱导线粒体损伤而激活TLR942 4.5TLR9 JEV