盾壳霉双组份组氨酸激酶基因CmHK03的功能研究.pdfVIP

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2021-01-11 发布于江苏
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盾壳霉双组份组氨酸激酶基因CmHK03的功能研究.pdf

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盾壳霉双组份组氨酸激酶基因CmHK03 的功能研究目录摘要i Abstract iii 缩略词表（Abbreviation ）v 第一章文献综述 1 1 核盘菌研究现状 1 1.1 核盘菌生物学特征 1 1.2 核盘菌的危害与防治2 2 盾壳霉研究现状4 2.1 盾壳霉生物学及生态学特征4 2.2 盾壳霉与核盘菌的互作研究5 3 双组份信号系统7 3.1 双组份信号系统的概念7 3.2 酿酒酵母双组份组信号系统9 4 组氨酸激酶研究进展 10 5 本研究的目的及内容 12 第二章材料与方法 13 1 试验材料 13 1.1 菌株和质粒 13 1.2 培养基 13 1.3 常用试剂及仪器 15 2 试验方法 17 2.1 盾壳霉菌株的保存与培养 17 2.2 盾壳霉基因组DNA 的提取 17 2.3 PCR 18 2.4 RT-qPCR 19 2.5 DNA 的琼脂糖电泳 19 2.6 PCR 产物纯化20 2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备20 2.8 DNA 克隆技术21 2.9 重组质粒的鉴定与提取22 2.10 PEG 介导的原生质体转化23 2.11 RNA 的提取与反转录24 2.12 CmHK03 基因敲除载体的构建26 2.13 CmHK03 敲除突变体的互补27 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位论文 2.14 CmHK03 超表达载体的构建28 2.15 生长速率测定28 2.16 产孢量分析28 2.17 寄生核盘菌能力的检测29 2.18 NBT 染色30 2.19 甘油含量测定30 第三章结果与分析33 1 CmHK03 基因的克隆与系统进化分析33 2 CmHK03 敲除与回补突变体的获得34 3 CmHK03 超表达突变体的获得35 4 突变体生物学表型分析36 4.1 突变体菌落形态特征观察47 4.2 突变体菌丝生长速度测定48 4.3 突变体的产孢量和菌丝鲜重测定48 4.4 突变体寄生核盘菌能力的检测50 4.5 NBT 染色检测活性氧含量52 4.6 突变体对杀菌剂的敏感性测定36 4.7 突变体对丙酮醛的敏感性测定40 4.8 突变体对渗透压胁迫的敏感性测定40 4.9 突变体对其他非生物胁迫的敏感性测定42 4.10 突变体对草酸的敏感性测定42 4.11 菌丝甘油含量测定44 4.12 甘油合成关键酶基因的表达量测定45 4.13 胁迫条件下Hog1 通路相关基因的表达量测定46 第四章全文讨论与展望53 1 讨