利用CRISPR_CAS9技术鉴定BRANCHED1和BRANCHED2基因参与调控油菜分枝的功能.pdfVIP

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2021-01-11 发布于江苏
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利用CRISPR_CAS9技术鉴定BRANCHED1和BRANCHED2基因参与调控油菜分枝的功能.pdf

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HuazhongAgriculturalUniversity 2020MastersDegree Thesis TableofContents TableofContentsiii ABSTRACTiv 摘要vii LIST OFABBREVIATIONSviii 1.REVIEW OFLITERATURE1 1.1 GeneralIntroduction1 1.2 PlantArchitectureofRapeseed:An Overview3 1.3 Regulation Mechanism of ShootBranching7 1.3.1 Molecular MechanismsofRegulation of ShootBranching7 1.3.2 HormonalRegulation of ShootArchitecture13 1.3.3 EnvironmentalFactorsRegulating Shoot Branching17 1.4 GenomeEditingTechnology20 1.4.1 ZincFingerNucleaseTechnology21 1.4.2 TranscriptionActivator-likeEffectorNuclease(TALEN)22 1.4.3 CRISPR/Cas9GenomeEditingTechnology25 1.4.4 Application ofCRISPR/Cas9Technology in RapeseedBreeding27 1.5 Theaimsandobjectivesofthisstudy28 2.MATERIALSANDMETHODS29 2.1 Materials29 2.1.1 Plantmaterials29 2.1.2 Reagentsused29 2.1.3 Componentsofeachpreparedreagents29 2.2 Methods32 2.2.1 Genecloningandcomparative sequencing32 2.2.2 CRISPR/Cas9target locusselection and construct assembly32 2.2.3 Agrobacterium-mediatedtransformation ofrapeseed32 2.2.4 Identification ofpositivetransgenicplants34 2.2.5 SequencingAnalysisofMutantPlants36 2.2.6 Fieldexperimentsandmorphological analysis38 iii CRISPR/Cas9-mediatedknockout ofBRANCHED1andBRANCHED2 gene inrapeseedregulatesshootbranching 2.2.7 Bioinformaticsanalysis39 2.2.8 Statistical analysis39 3.RESULTS40 3.1 Molecular cloningofBRC1andBRC2homologsinB.napus40 3.2 Characterization ofBRC1andBRC2homologsinB.napus45 3.2.1 Sequencealignment ofBnaBRC1andBnaBRC2 genes45 3.2.2 M