鸭疫里氏杆菌OMP85和OMP76基因缺失株的构建及其生物学特性研究.pdfVIP

鸭疫里氏杆菌OMP85 和OMP76 基因缺失株的构建及其生物学特性研究 目录 摘要 ⅰ Abstract ⅲ 缩略语表 ⅵ 第一章 文献综述 1 1 鸭疫里氏杆菌病研究进展 1 1.1 病原学1 1.2 流行病学和临床特征 2 1.3 诊断与防控 2 2 鸭疫里氏杆菌毒力因子研究进展 3 2.1 外膜蛋白3 2.2 TonB 系统 4 2.3 脂多糖5 2.4 Ⅸ型蛋白分泌系统分泌蛋白6 3 Mariner 转座子诱变技术研究进展 6 3.1 转座子研究进展6 3.2 Mariner 转座家族 7 3.3 Himar1 转座元件 7 3.4 Tn-seq 技术研究进展 8 第二章 鸭疫里氏杆菌OMP85 和OMP76 基因缺失株的构建及其致病性评价 9 1 目的和意义9 2 材料 9 2.1 菌株与载体 9 2.2 细菌培养条件 9 2.3 主要分子生物学及生化试剂 10 2.4 试验动物 10 2.5 主要溶液的配制 10 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位（毕业）论文 2.6 主要仪器设备 12 3 方法 12 3.1 RA-YM 基因组的提取 12 3.2 OMP85 和OMP76 基因同源臂的克隆与鉴定 12 3.3 OMP85 和OMP76 基因抗性表达盒的构建与鉴定 15 3.4 OMP85 和OMP76 基因缺失株的构建和鉴定 17 3.5 OMP85 和OMP76 基因缺失株回复株质粒的构建 18 3.6 OMP85 和OMP76 基因缺失株回复株的构建与筛选 23 3.7 OMP85 和OMP76 基因缺失株生物学特性的研究24 3.8 OMP85 和OMP76 基因缺失株致病性的研究 27 4 结果 28 4.1 壮观霉素抗性基因、OMP85 和OMP76 基因同源臂的扩增28 4.2 OMP85 和OMP76 基因抗性表达盒的构建 29 4.3 基因抗性表达盒OMP85-LSR 和OMP76-LSR 的扩增 29 4.4 OMP85 和OMP76 基因缺失株的构建与鉴定 29 4.5 OMP85 和OMP76 基因缺失株回复株的构建与鉴定30 4.6 OMP85 和OMP76 基因缺失株生物学特性的研究31 4.7 OMP85 和OMP76 基因缺失株对雏鸭致病性的研究 36 5 讨论 39 5.1 OMP85 对RA-YM 致病性的影响 39 5.2 OMP76 对RA-YM 致病性的影响 40 6 小结 41 第三章 应用Mariner 转座子构建RA-YM 随机突变库的初步探索42 1 目的与意义42 2 材料与方法 42 2.1 试验菌株与质粒42 2.2 诱变质粒pSAM-Spc 的构建43 2.3 不同启动子诱变质粒的构建43 II 鸭疫里氏杆菌OMP85 和OMP76 基因缺失株的构建及其生物学特性研究 2.4 RA-YM Mariner 转座子突变库的构建及阳性突变株的筛选43 2.5 三种启动子诱变质粒的的筛选 43 2.6 接合转导条件的优化 44 2.7 转座子突变株的鉴定 44 3 结果 45 3.1 诱变质粒pSAM-SpcPro 结果 45 3.2 接合转移条件的确定 46 3.3 鸭疫里氏杆菌转座子插入突变株的鉴定 47 3.4 突变株插入位点的定位 47 4 讨论与分析 48 5 工作展望49 结论 50 参考文献 51 附录59 致谢 63 III 鸭疫里氏杆菌OMP85 和OMP76 基因缺失株的构建及其生物学特性研究 摘要 鸭疫里氏杆菌病是由鸭疫里氏杆菌（Riemerella anatipestifer ，RA ）引起的急