油菜开花期相关基因CO、C3H17和KHZ1的功能研究.pdfVIP

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2021-01-11 发布于江苏
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油菜开花期相关基因CO、C3H17和KHZ1的功能研究.pdf

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油菜开花期相关基因CO、C3H17 和KHZ1 的功能研究目录摘要i Abstract iii 缩略语表v 1 前言 1 1.1 开花期相关研究 1 1.1.1 拟南芥开花期研究 1 1.1.2 甘蓝型油菜开花期研究 3 1.2 CO 基因相关研究 5 1.2.1 拟南芥CO 基因的研究 5 1.2.2 甘蓝型油菜CO 基因的研究 6 1.3 CCCH 家族相关研究 6 1.4 CRISPR/Cas9 相关研究 8 1.4.1 CRISPR/Cas 系统的结构及原理 8 1.4.2 CRISPR/Cas 系统的分类 9 1.4.3 人工合成的CRISPR/Cas9 系统 9 1.4.4 CRISPR/Cas9 突变类型及检测方法 9 1.4.5 CRISPR/Cas9 编辑效率的影响因素 10 1.4.6 CRISPR/Cas9 在植物中的应用 10 1.5 本研究的目的和意义 11 2 材料与方法 12 2.1 植物材料 12 2.1.1 拟南芥材料 12 2.1.2 油菜材料 12 2.2 菌株与载体 12 2.3 生物信息学分析及系统进化树的构建 12 2.4 超表达载体的构建 13 2.5 CRISPR/Cas9 载体的改造及构建 13 2.6 拟南芥遗传转化及转基因阳性苗筛选 14 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位（毕业）论文 2.7 甘蓝型油菜遗传转化 14 2.8 甘蓝型油菜CRISPR/Cas9 阳性植株鉴定及编辑检测 15 2.8.1 转基因阳性植株的鉴定 15 2.8.2 转基因阳性植株的编辑检测 16 2.9 DNA 提取 17 2.9.1 简单法提取DNA 17 2.9.2 CTAB 法提取DNA 17 2.10 RNA 的提取、RT-PCR 和Quantitative real-time PCR 17 2.11 材料的种植及开花表型的考察 18 3 结果分析 19 3.1 目的基因的结构分析 19 3.2 目的基因的保守结构域和系统进化 19 3.3 拟南芥超表达转基因阳性株系分析23 3.3.1 拟南芥阳性苗鉴定23 3.3.2 拟南芥阳性苗后代表型考察23 3.3.3 拟南芥阳性苗后代基因表达分析25 3.4 甘蓝型油菜CRISPR/Cas9 突变后代分析27 3.4.1 甘蓝型油菜CRISPR/Cas9 转基因植株阳性鉴定27 3.4.2 甘蓝型油菜CRISPR/Cas9 靶点效率检测28 3.4.3 甘蓝型油菜编辑植株T0 代的突变类型29 3.4.4 甘蓝型油菜突变体T1 代分析 33 4 讨论 35 4.1 CRISPR/Cas9 技术在甘蓝型油菜中的应用 35 4.2 BnaCO 基因调控甘蓝型油菜开花 36 4.3 BnaC3H17 和BnaKHZ1 基因功能的初步探索 37 参考文献 39 附录49 致谢 55 II