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猪尸体堆肥中高温纤维素降解菌的筛选 目录 摘要i ABSTACT iii 缩略语表v 第一章 文献综述 1 1.1 高温菌的研究进展 1 1.1.1 堆肥中高温菌的筛选 1 1.1.2 耐高温菌在堆肥中的应用2 1.2 纤维素酶的研究进展2 1.2.1 纤维素酶的组成2 1.2.2 纤维素酶的作用机理3 1.3 纤维素降解菌的研究进展3 1.3.1 纤维素酶的来源3 1.3.2 纤维素降解细菌的筛选4 1.3.3 细菌纤维素降解菌在堆肥中的应用4 1.4 高温纤维素降解菌发酵条件的研究 5 1.4.1 培养基的优化 5 1.4.2 培养条件的优化 5 1.5 诱变育种6 1.5.1 物理诱变 6 1.5.2 化学诱变7 1.6 全基因组测序技术的研究进展7 1.6.1 全基因组测序技术发展史7 1.6.2 全基因组测序技术在Geobacillus 中的应用 8 1.7 研究目的与意义9 第二章 材料与方法 10 2.1 试验材料 10 2.1.1 试验样品 10 I 猪尸体堆肥中高温纤维素降解菌的筛选 2.1.2 主要试剂、药品、试剂盒 11 2.1.3 主要仪器设备 12 2.2 常用化学试剂配制 13 2.2.1 筛选微生物所用培养基及配方 13 2.2.2 用于理化参数分析的溶液配制 13 2.2.3 提取细菌基因组DNA 的溶液配制 14 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳溶液配制 14 2.2.5 细菌生理生化溶液配制 15 2.3 主要应用到的生物信息学网站和分析软件 15 2.4 试验方法 15 2.4.1 高温纤维素降解菌的分离、纯化及鉴定 15 2.4.2 菌株高温驯化20 2.4.3 细菌紫外诱变20 2.4.4 菌株生长条件的初步测定 2 1 2.4.5 产酶条件的优化及酶学特性的研究2 1 2.4.6 全基因组测序22 第三章 结果与分析 26 3.1 猪尸体和秸秆堆肥样品高温纤维素降解菌分离培养 26 3.2 纤维素酶酶活力测定26 3.3 菌株的鉴定结果27 3.3.1 菌株菌体形态观察27 3.3.2 CMC-4 菌株的生理生化特征 28 3.3.3 CMC-4 的16S rDNA 测序分析28 3.3.4 系统发育进化树的构建与分析29 3.4 CMC-4 高温驯化结果29 3.4.1 存活率与驯化代数29 3.4.2 驯化前后菌株菌落特征及菌体形态特征比较 30 3.5 CMC-4 菌株的紫外诱变 31 3.5.1 菌悬液的制备 31 II 猪尸体堆肥中高温纤维素降解菌的筛选 3.5.2 紫外线诱变剂量的选择 32