基于PRRSV人工感染鄂通两头乌筛选抗病指示性状和候选基因.pdfVIP

利用大白猪×通城猪高代横交群体鉴定PRRS 抗病基因 目 录 摘 要I ABSTRACTIV ABBREVIATION VIII 缩略语表 （ ） 1 前言 1 1.1 研究问题的由来 1 1.2 文献综述 2 1.2.1 PRRS 流行病学特点和临床症状 2 1.2.2 PRRSV 生物学特征 4 1.2.3 宿主对PRRSV 感染的免疫应答 7 1.2.4 PRRSV 抗病基因研究进展 9 1.3 本研究的目的与意义 10 2. 材料与方法 11 2.1 技术路线 11 2.2 材料 11 2.2.1 试验动物和HP-PRRSV 11 2.2.2 遗传材料 12 2.2.3 试剂与耗材 12 2.2.4 主要试剂的配制 13 2.2.5 主要实验设备 13 2.2.6 主要软件、主要生物学数据库与相关网站 14 2.3 方法 14 2.3.1 HP- PRRSV 人工感染试验 14 2.3.2 病毒载量测定 14 2.3.3 体重增长 17 2.3.4 血常规指标检测 17 2.3.5 RNA-seq 测序样品的准备 18 2.3.6 外周血RNA-seq 测序 18 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位 （毕业）论文 2.3.7 测序结果分析 19 2.3.8 WGCNA20 2.3.9 载体构建和质粒提取2 1 3 结果25 3.1 HP-PRRSV 人工感染后性状的测定25 3.1.1 临床症状25 3.1.2 病毒载量26 3.1.3 体重增长27 3.1.4 血常规指标28 3.1.5 病毒载量和体重增长以及血常规指标在抗病组与易感组的差异分析29 3.1.6 筛选PRRS 抗病指示性状 31 3.2 基于外周血RNA 测序筛选抗病候选基因32 3.2.1 RNA 质量检测 32 3.2.2 测序数据过滤与比对33 3.2.3 差异表达基因分析34 3.2.4 差异表达基因的功能富集35 3.2.5 WGCNA 共表达网络分析37 4 讨论4 1 4.1 本研究中的高代横交群体在HP-PRRSV 感染后的抗病性存在差异 4 1 4.2 HP-PRRSV 感染后不同时间点存在免疫应答的特有通路42 4.3 对PRRS 抗病和易感的两组间存在特有免疫应答通路43 5. 全文小结44 5.1 本研究的主要结论 44 5.2 本研究的创新点 44 5.3 本研究的不足与进一步工作的建议 44 参考文献46 附 录59 致 谢63 II 利用大白猪×通城猪高代横交群体鉴定PRRS 抗病基因 摘 要 猪繁殖与呼吸综合征 （Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome，PRRS）是 由猪繁殖与呼吸综合征病毒 （Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus， PRRSV）引起的一种以各年龄段猪呼吸障碍、母猪繁殖障碍、仔猪高死亡率为主要特 征的病毒性疾病。迄今为止PRRS 的防控方式主要有生物安全和疫苗接种，目前PRRSV 商业化的灭活疫苗主要是基于单个的PRRSV 毒株，对高度变异的PRRSV 感染没有发 挥很好的保护作用，而弱毒疫苗可能出现毒力返强等问题。因此在遗传水平上增强 宿主对PRRS 的抗病性，实施抗病育种，为PRRS 防控提供新的方法。 本课题组通过人工感染PRRSV 后发现通城猪与大白猪相比表现出较强的抗病 力，两品