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mstn 基因降低鱼类脂肪沉积的作用研究 目录 摘要 i Abstract iii 缩略词表 vi 第一章 文献综述 1 1 mstn 基因的研究进展 1 1.1 mstn 基因概述 1 1.2 mstn 对肌肉发育的调控作用 1 1.3 mstn 对脂肪代谢的调控作用 2 2 脂肪与鱼类肌肉品质 2 3 基因敲除技术与遗传育种 3 4.本文的研究内容与意义 4 第二章 泥鳅mstn 基因缺失对肌肉组织发育以及脂肪含量的影响 5 1 前言 5 2 材料与方法 6 2.1 实验动物 6 2.2 主要仪器和设备 6 2.3 主要试剂及试剂盒 7 2.4 泥鳅肌肉组织总RNA 的提取与反转录 7 2.5 目的片段切胶回收与载体连接 9 2.6 不同组织中的表达分析 10 2.7 mstn 基因gRNA 的设计 11 2.8 突变体的制备与筛选 11 2.9 基因表达分析 12 2.10 组织学形态观察 14 2.11 统计分析 15 3. 结果分析 15 3.1 泥鳅mstn 基因的cDNA 序列及在不同组织中的表达分析 15 3.2 CRISPR/Cas9 技术敲除泥鳅mstn 基因 16 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位论文 3.3 qPCR 和 Western Blot 检测mstn 基因表达 17 3.4 mstn 缺失对泥鳅生长发育的影响 18 3.5 mstn 缺失对泥鳅肌肉组织中肌细胞形态及脂肪含量的影响 19 4 讨论 20 5 小结 21 第三章 mstn 基因对泥鳅肌肉组织中脂肪代谢的调控作用 22 1 前言 22 2 材料与方法 23 2.1 实验材料 23 2.2 肌肉组织中的脂质提取 24 2.3 LC-MS 参数 24 2.4 肌肉样本中脂质的定性和相对定量分析 25 2.5 实时定量PCR 分析相关基因表达 25 2.6 肌肉组织中ATP 含量检测 26 2.7 数据分析 27 3 结果与分析 27 3.1 泥鳅肌肉组织中脂质组分分析 27 3.2 mstn 对脂肪合成相关基因表达的影响 30 3.3 mstn 对ATP 含量的影响 31 3.4 mstn 对线粒体呼吸链复合体相关基因表达的影响 31 4 讨论 33 5. 小结 34 第四章 mstn 敲降影响肌细胞相关代谢活动的机制研究 35 1 前言 35 2 材料与方法 35 2.1 FHM 细胞系的培养 35 2.2 siRNA 设计 36 2.3 细胞油红O 染色 37 3 结果 37 II mstn 基因降低鱼类脂肪沉积的作用研究 3.1 mstn 敲降模型构建 37 3.2 mstn 调控不同脂肪酸诱导的细胞内脂肪沉积 38 3.3 mstn 通过抑制细胞内脂肪合成来影响脂肪沉积 40 4 讨论 43 5 小结 43 第五章 结论 45 参考文献 46 附录 58 致谢 59