玉米苗期致死突变体基因MSL1的精细定位及功能初探.pdfVIP

玉米苗期致死突变体基因MSL1 的精细定位及功能初探 目 录 目 录 I 摘 要i Abstractiii 缩略语表v 1.前言 1 1.1 玉米苗期阶段致死性状的相关研究 1 1.1.1 PPR (Pentatricopeptide Repeat) 蛋白功能缺失与致死性状相关2 1.1.2 其它基因功能缺失引起致死性状的研究进展4 1.2 表皮蜡质生物合成的相关研究5 1.2.1 表皮蜡质的组分及功能5 1.2.2 表皮蜡质的生物合成途径6 超长链脂肪酸的合成6 表皮蜡质成分合成7 1.2.3 超长链脂肪酸合成关键酶KCS 的相关研究9 1.3 本研究的目的和意义 10 2.材料与方法 10 2.1 试验材料与来源 10 2.2 WT 和msl1 的突变体表型分析 11 2.2.1 叶片及茎尖部位的石蜡切片观察 11 2.2.2 SAM 大小测定 11 2.2.3 扫描电镜观察 11 2.3 MSL1 的遗传分析 12 2.3.1 性状分离比统计 12 2.3.2 BSR-seq 方法进行初定位 12 2.3.3 开发KASP 标记进行精细定位 13 2.3.4 候选基因的检测 13 2.4 转录组测序分析 14 2.5 候选基因进化分析 14 I 华中农业大学2020 届硕士研究生毕业论文 2.6 MSL1 的表达模式分析 15 2.6.1 植物组织RNA 提取和逆转录 15 2.6.2 实时荧光定量PCR (Real time-qRT-PCR) 15 2.6.3 RNA 原位杂交 15 2.7 MSL1 的叶片表皮蜡质成分含量分析 16 2.7.1 表皮蜡质的提取 16 2.7.2 气相色谱与质谱分析 16 2.8 转基因载体构建及遗传转化 17 2.8.1 目的基因gRNA 的设计 17 2.8.2 载体线性化及片段的酶切连接 17 2.8.3 农杆菌阳性克隆鉴定 18 2.8.4 转基因载体遗传转化 18 3. 实验结果与分析 18 3.1 突变体msl1 的苗期表型鉴定 18 3.1.1 植物学表型观察 18 3.1.2 细胞学表型观察 19 SAM 大小的测定 19 叶片和茎尖的石蜡切片染色观察20 3.2.1 性状分离比的统计22 3.2.2 MSL1 的初定位22 3.2.3 MSL1 的精细定位23 3.2.4 MSL1 候选基因的分析24 保守功能域序列的检测24 蛋白功能分析26 Zm579 表达模式分析28 3.2.5 构建Zm579 的CRISPR/Cas9 转基因载体29 3.3 msl1 的叶片表皮蜡质含量分析30 3.3.1 叶片表面蜡质扫描电镜观察31 3.3.2 叶片表面蜡质成分及含量分析31 3.4 MSL1 转录组水平调控分析32 II 玉米苗期致死突变体基因MSL1 的精细定位及功能初探 3.4.1 样品及测序数据质量分析32 3.4.2 测序数据比对分析33 3.4.3 玉米蜡质合成相关通路差异表达基因分析35 4. 讨论36 4.1 VLCFAs 合成受阻与