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Bna-novel-miR311-HSC70-1 模块响应甘蓝型油菜热胁迫
目录
摘 要 i
Abstract iii
缩略语表 v
1.前言 1
1.1 植物 miRNA 的研究进展 1
1.1.1 植物 miRNA 的发现 1
1.1.2 植物 miRNA 基因的产生 2
1.1.3 植物 miRNA 的生物合成 3
1.1.4 植物 miRNA 的调控机制 4
1.1.5 植物 miRNA 及其靶基因的挖掘 5
1.2 植物 miRNA 的生物学功能 6
1.3 miRNA 在油菜中的研究进展 7
1.4 植物高温胁迫的研究进展 8
1.4.1 高温胁迫的危害 8
1.4.2 植物响应高温胁迫的研究进展 8
1.4.3 植物 HSP70 蛋白家族的研究进展 8
1.4.4 植物 miRNA 响应高温胁迫的研究进展 10
1.5 本研究的目的和意义 10
2 实验材料与方法 12
2.1 实验材料 12
2.2 实验方法 12
2.2.1 油菜茎顶端总 RNA 提取 12
2.2.2 sRNA 测序及分析流程 13
2.2.3 降解组测序与分析 13
2.2.4 miRNA 茎环反转录及定量 PCR 15
2.2.5 靶基因反转录及定量 PCR 16
I
华中农业大学 2020 届硕士研究生（学位）论文
2.2.6 RLM-RACE 技术验证靶基因切割位点 17
2.2.7 novel-miR311 和 BnaA06g01660D 超表达载体的构建 19
2.2.8 植物的遗传转化 21
2.2.9 高温逆境胁迫处理 23
2.2.10 植物体内可溶性糖的测定 24
3 结果与分析 26
3.1 Bna-novel-miR311 的分析 26
3.2 Bna-novel-miR311 靶基因 27
3.3 Bna-novel-miR311 靶基因与其在拟南芥中的同源基因分析 28
3.4 Bna-novel-miR311 在拟南芥高温胁迫中的功能验证 29
3.4.1 Bna-novel-miR311 及其靶标在拟南芥组织中的表达分析 29
3.4.2 高温胁迫前后拟南芥阳性株系的表型观察 29
3.4.3 高温胁迫前后拟南芥阳性株系的可溶性糖分析 30
3.5 Bna-novel-miR311 在甘蓝型油菜高温胁迫中的功能验证 31
3.5.1 Bna-novel-miR311 在甘蓝型油菜组织中的表达分析 31
3.5.2 高温胁迫前后油菜阳性株系种子的发芽分析 32
3.5.3 高温胁迫前后油菜阳性株系的表型观察 34
3.5.4 高温胁迫前后 novel-miR311 及其靶标在油菜阳性株系中的表达分析 34
3.5.5 高温胁迫前后油菜阳性株系的可溶性糖分析 35
4 讨论 36
4.1 Bna-novel-miR311 及其靶基因 36
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