二苯甲酮-3对小鼠体外培养睾丸支持细胞的影响研究.pdfVIP

二苯甲酮‐3对小鼠支持细胞的影响与作用机制研究  目录   摘要 i  Abstract ii  缩略词 iii  1 文献综述 1  1.1 BP‐3研究进展  1  1.2 支持细胞研究进展  6  1.3研究的目的和意义  10  2 材料与方法 11  2.1 材料  11  2.2 实验方法  16  3 结果 25  3.1 体外培养支持细胞的纯度  25  3.2 BP‐3改变体外培养支持细胞形态  27  3.3 BP‐3降低体外培养支持细胞细胞活力  27  3.4 BP‐3破坏支持细胞屏障功能  28  3.5 BP‐3改变支持细胞细胞骨架分布并降低相关蛋白表达  32  3.6 BP‐3不影响支持细胞存活  34  4 讨论 38  4.1 BP‐3通过支持细胞损坏雄性生殖的可能途径  38  4.2 BP‐3与其他环境化合物对支持细胞的作用对比  40  5 全文结论 43  6 创新点及不足 44  参考文献 45  致谢 54    I   二苯甲酮‐3对小鼠支持细胞的影响与作用机制研究  摘要   二苯甲酮-3 （BP-3 ）是在个人护理用品中广泛添加的紫外线吸收成分之一。 至今多项研究显示其暴露人群广泛，且可通过血液聚积于肝脏，睾丸等器官中进 而影响相应的生理功能。虽然已经证实 BP-3 可以破坏精子发生过程，但其损伤 机制尚不明确。本研究利用 20 日龄昆明雄性小鼠睾丸中分离的原代支持细胞体 外培养模型，研究不同浓度的 BP-3 （0 ，5，50, 100 μmol/L ）对支持细胞活性和 功能的影响，主要包括细胞形态、活力和凋亡、跨膜电阻、细胞骨架结构和分布、 支持细胞屏障功能等，尝试从睾丸支持细胞方面探究 BP-3 影响雄性生殖健康的 作用途径。主要研究结果如下： 支持细胞与不同浓度的 BP-3 共培养 24 h 。结果发现，100 μmol/L 组支持细 胞的形态发生了明显变化、细胞活力显著下降（P0.05 ）。进一步研究发现该浓 度的 BP-3 处理 24 h 后支持细胞跨膜电阻值显著降低（P0.05 ）、部分支持细胞 连接蛋白（ZO-1 ，Occludin ，Connexin43 ）表达水平显著降低（P0.01 ）、外质特 化蛋白 β-catennin 细胞定位发生变化、Rictor 蛋白表达水平显著降低（P0.01 、 微丝在支持细胞内的分布紊乱、DNA 损伤标志蛋白 γH2AX 的表达水平显著上 升。然而，研究发现该浓度的 BP-3 处理支持细胞 24 h 并未引起细胞凋亡。 综上所述，一定浓度的 BP-3 处理可以在不引起支持细胞凋亡的情况下诱导 多种支持细胞形态、结构和功能等多方面的异常，这可能是 BP-3 干扰和损坏雄 性生殖的途径。本研究结果拓展了 BP-3 的生殖毒性信息，为寻找解决其对雄性 生殖的损害提供了部分理论依据。 关键词：支持细胞; 二苯甲酮-3; 细胞连接; 细胞骨架; DNA 损伤; 细胞凋亡              i   二苯甲酮‐3对小鼠支持细胞的影响与作用机制研究  缩略词 Abbreviation 缩略词 英文全称 中文全称 Abbreviation