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去势后肾上腺源雄激素代偿性分泌研究 目录 摘要 ⅰ ABSTRACT ⅲ 缩略词表 ⅵ 1 综述 1 1.1 去势 1 1.2 KISS1 基因免疫去势 2 1.3 肾上腺结构及HPA 轴 4 1.4 去势对肾上腺的影响 5 1.5 转录组测序技术 6 1.6 研究目的与意义 7 2 去势大鼠的肾上腺代偿性研究 8 2.1 前言 8 2.2 材料与方法 9 2.2.1 材料 9 2.2.2 方法 11 2.3 结果与分析 18 2.3.1 大鼠外周血液中相关激素的测定 18 2.3.2 肾上腺组织切片HE 观察 21 2.3.3 荧光定量 PCR 结果 22 2.4 讨论 26 2.4.1 去势对肾上腺相关激素分泌的影响 26 2.4.2 影响肾上腺皮质激素分泌的基因表达分析 26 2.5 小结 28 3 去势山羊的肾上腺代偿性研究 29 3.1 前言 29 3.2 材料与方法 30 3.2.1 材料 30 I 华中农业大学2020 届硕士研究生学位论文 3.2.2 方法 31 3.3 结果与分析 36 3.3.1 山羊外周血液中相关激素结果 36 3.3.2 山羊肾上腺转录组测序差异基因表达分析 38 3.3.3 山羊肾上腺转录组测序差异基因GO 富集分析 41 3.3.4 山羊肾上腺转录组测序差异基因KEGG 富集分析 44 3.3.5 QPCR 对差异基因的验证 47 3.4 讨论 49 3.4.1 去势对肾上腺相关激素分泌的影响 49 3.4.2 转录组测序差异基因分析 49 3.5 小结 52 4 结论 53 4.1 研究结论 53 4.2 创新性 53 4.3 下一步工作计划 53 参考文献 54 发表学术论文 67 致 谢 68 II 去势后肾上腺源雄激素代偿性分泌研究 摘要 雄性动物血液循环中的雄激素主要由睾丸和肾上腺分泌。手术阉割后，下丘脑-垂 体-睾丸轴功能紊乱，造成睾丸源的雄性激素迅速减少。此时，垂体促肾上腺皮质激素 （ACTH ）大量分泌，刺激肾上腺皮质的弱雄激素如脱氢表雄酮（DHEA ）的分泌量增 加，肾上腺表现出代偿性分泌作用。因此，本试验旨在研究去势后雄性动物肾上腺源雄 激素代偿性分泌产生的原因与调控机制。本课题组前期针对雄性大鼠和山羊的KISS1 基 因免疫去势表现出了良好的去势效果。本研究以大鼠和山羊为研究对象，首先将36 只8 周龄SD 雄性大鼠随机分为三组，分别进行手术去势、PVAX-B2L-Kisspeptin-54 asd 疫苗 （PBK 免疫去势）注射和PVAX-asd 疫苗 （空质粒对照组）注射。确认去势效果后分别 检测肾上腺相关激素（ACTH、DHEA 和皮质酮CORT ），组织结构变化和相关基因表达 情况。再将 15 只5 月龄雄性夷陵山羊随机分为三组，进行同大鼠一样的处理，确认去 势效果后检测ACTH 和DHEA 激素水平，再利用转录组测序技术对肾上腺组织进行分 析。主要研究结果如下： 1、通过检测雄性大鼠和山羊血清激素水平，在手术去势组中，观察到从试验第 4 周起CORT 显著增加 （P0.05 ），ACTH 和DHEA 在第6 周开始显著增加 （P0.05 ）， 并持续到试验结束。在免疫去势组中，第4